C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C40B 40/06 (2006.01) C40B 50/06 (2006.01)
Patent
CA 2744153
The present invention provides compositions and methods for rapid assembly of one or more assembled polynucleotides from a plu-rality of component polynucleotides. The methods of the invention utilize circular nucleic acid vectors that comprise a DNA segment D flanked by an annealable linker sequence, annealable linker sequence pairs LA and LB, or annealable linker sequence / primer binding segment pairs LA and PB or PA and LB. Restriction endonuclease digestion of a plurality of vec-tors containing the DNA segments to be assembled generates a plurality of DNA fragments comprising the elements PA-D-LB, LA-D-LB, and LA-D-PB or D-LB, LA-D-LB, and LA-D. The sequences of annealable linker se-quences LA and LB provide complementary termini to the DNA frag-ments, which are utilized in host cell mediated homologous recombination or together with promer binding segments PA and PB in a polymerase cy-cling assembly reaction for the ordered assembly of the various DNA seg-ments into one or more assembled polynucleotides.
La présente invention concerne des compositions et des procédés pour lassemblage rapide dun ou plusieurs polynucléotides assemblés parmi une pluralité de polynucléotides composants. Les procédés de linvention utilisent des vecteurs dacide nucléique circulaires qui comprennent un segment dADN D flanqué par une séquence de lieur hybridable, des paires de séquences de lieur hybridables LA et LB, ou des paires de séquence de lieur hybridable / segment de liaison damorce LA et PB ou PA et LB. La digestion par des endonucléases de restriction dune pluralité de vecteurs contenant les segments dADN à assembler génère une pluralité de fragments dADN comprenant les éléments PA-D-LB, LA-D-LB, et LA-D-PB ou D-LB, LA-D-LB, et LA-D. Les séquences de séquences de lieur hybridables LA et LB confèrent des terminaisons complémentaires aux fragments dADN, qui sont utilisées dans la recombinaison homologue véhiculée par une cellule hôte ou conjointement avec des segments de liaison damorce PA et PB dans une réaction dassemblage par cyclage de polymérase pour lassemblage ordonné des différents segments dADN en un ou plusieurs polynucléotides assemblés.
Chandran Sunil S.
Dean Erik Jedediah
Lowe Raymond
Platt Darren M.
Serber Zach
Amyris Inc.
Osler Hoskin & Harcourt Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1775815