C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/867 (2006.01)
Patent
CA 2327444
A combination of adenoviral and retroviral vectors used to construct second generation packaging cells that deliver marker genes to target cells is described. A vector based upon Moloney murine leukemia virus (MLV) was used to deliver marker genes, and an adenovirus-based delivery system was used to deliver MLV structural genes (gagpol and env) to cultured cells. The procedure transformed the cells into new retroviral producer cells, which generate replication-incompetent retroviral particles in the culture supernatant for transferring marker genes to target cells. The titer of the retroviral- containing supernatant generated from the second generation producer cells reached above 105 cfu/ml, which is comparable to the MLV-based producer cell lines currently used in human gene therapy trials. The vector and procedures are adaptable for experimental human gene therapy in which the new producer cells are transplanted into patients for continuous gene transfer.
L'invention concerne une combinaison de vecteurs adénoviraux et rétroviraux utilisée pour élaborer des cellules d'encapsidation de la seconde génération qui transfèrent des gènes marqueurs à des cellules cibles. On a utilisé un vecteur reposant sur le virus de la leucémie murine pour transférer les gènes marqueurs, d'une part, et un système de transfert à base adénovirale pour transférer les gènes structuraux de ladite leucémie (gagpol et env) à des cellules mises en culture, d'autre part. Via cette procédure, on a pu transformer des cellules en nouvelles cellules productrices rétrovirales, générant des particules rétrovirales à incompétence de réplication dans le surnageant de culture, pour assurer le transfert de gènes marqueurs à des cellules cibles. Le titre du surnageant rétroviral issu des cellules productrices de la seconde génération a ainsi dépassé 105 cfu/ml, ce qui est comparable au niveau des lignées cellulaires productrices reposant sur le virus de la leucémie murine, actuellement utilisées dans les essais de thérapie génique chez l'homme. On peut utiliser ce type de vecteur et de procédure pour la thérapie génique expérimentale chez l'homme, ce qui revient à transplanter aux patients les nouvelles cellules productrices pour les besoins d'un transfert génique continu.
J. N. Tang Jordan
Lin Xinli
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Oklahoma Medical Research Foundation
LandOfFree
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