Continuous in-vitro evolution

Details Continuous in-vitro evolution Continuous in-vitro evolution

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/01 (2006.01) C07K 16/08 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)

Patent

CA 2328515

The present invention provides a method for the mutation, synthesis and selection of a protein which binds to a target molecule, the method comprising: (a) incubating a replicable mRNA molecule encoding the protein with ribonucleoside triphosphate precursors of RNA and an RNA-directed RNA polymerase, wherein the RNA-directed RNA polymerase replicates the mRNA molecule but introduces mutations thereby generating a population of mutant mRNA molecules; (b) incubating the mutant mRNA molecules from step (a) with a translation system under conditions which result in the synthesis of a population of mutant proteins such that after translation, mutant proteins are linked to their encoding mRNA molecules thereby forming a population of mutant protein/mRNA complexes; (c) selecting one or more mutant protein/mRNA complex(es) by exposing the population of mutant protein/mRNA complexes from step (b) to the target molecule and recovering the mutant protein/mRNA complex(es) bound thereto.

Cette invention a trait à une technique de mutation, de synthèse et de sélection d'une protéine se fixant à une molécule cible. Cette technique consiste, (a), à faire incuber une molécule d'ARN messager susceptible de réplication codant la protéine avec des précurseurs d'ARN, ribonucléoside-triphosphate, et une ARN polymérase dépendante de l'ARN; cette polymérase réplique la molécule d'ARN messager mais introduit des mutations, ce qui donne lieu à une population de molécules d'ARN messager mutantes; (b), à faire incuber les molécules mutantes obtenues lors de la phase (a) avec un système de traduction dans des conditions telles qu'a lieu la synthèse d'une population de protéines mutantes, de sorte qu'après la traduction, les protéines mutantes sont liées à leurs molécules d'ARN messager codant, ce qui donne lieu à une population de complexes protéine mutante/ARN messager; (c), à sélectionner un complexe protéine mutante/ARN messager, sinon plusieurs, en mettant la population du complexe ou des complexes protéine mutante/ARN messager, obtenu(s) lors de la phase (b), en présence d'une molécule cible et en récupérant ensuite le ou les complexes protéine mutante/ARN messager qui s'est fixé ou qui se sont fixés à cette molécule cible.

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