Copy dna and sense rna

Details Copy dna and sense rna Copy dna and sense rna

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/09 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2707436

The present invention relates generally to methods, compositions and kits for synthesizing sense RNA molecules from one or more RNA molecules of interest in a sample. In exemplary embodiments, the methods use a terminal tagging oligori-bonucleotide (rTTO) to join a DNA sequence tag to the 3'-termini of first-strand cDNA molecules. The use of an rTTO comprising ribonucleotides results in decreased oligonucleotide-derived background synthesis of RNA in the absence of sample RNA and, sur-prisingly and unexpectedly, also results in significantly increased yields of sense RNA molecules that exhibit sequences that are substantially identical to those of the RNA molecules of interest in the sample. The sense RNA molecules also have an RNA se-quence tag on their 5 '-termini that is useful for fixing the lengths of sense RNA molecules that are synthesized in a second or subsequent round.

La présente invention concerne, d'une manière générale, des procédés, des compositions et des kits pour synthétiser des molécules ARN sens à partir d'une ou plusieurs molécules d'ARN d'intérêt dans un échantillon. Dans des modes de réalisation à titre d'exemples, les procédés utilisent un oligoribonucléotide de marquage terminal (rTTO) pour réunir un marqueur de séquence d'ADN aux extrémités terminales 3' des molécules d'ADNc simple brin. L'utilisation d'un rTTO comprenant des ribonucléotides conduit à une synthèse d'arrière-plan de l'ARN issue d'oligonucléotides qui est réduite en l'absence d'ARN d'échantillon et, de manière surprenante et inattendue, conduit également à des rendements augmentés de manière significative de molécules d'ARN sens qui présentent des séquences qui sont sensiblement identiques à celles des molécules d'ARN d'intérêt dans l'échantillon. Les molécules d'ARN sens ont également un marqueur de séquence d'ARN sur leurs extrémités terminales 5' qui est utile pour fixer les longueurs des molécules d'ARN sens qui sont synthétisées dans un second cycle ou un cycle ultérieur.

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