C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2369533
The present invention provides a method for identifying one or more low abundance sequences differing by one or more single-base changes, insertions, or deletions, from a high abundance sequence in a plurality of target nucleotide sequences. The high abundance wild-type sequence is selectively removed using high fidelity polymerase chain reaction analog conversion, facilitated by optimal buffer conditions, to create a restriction endonuclease site in the high abundance wild-type gene, but not in the low abundance mutant gene. This allows for digestion of the high abundance DNA. Subsequently the low abundant mutant DNA is amplified and detected by the ligase detection reaction assay. The present invention also relates to a kit for carrying out this procedure.
L'invention concerne un procédé d'identification, dans un groupe de séquences nucléotidiques cibles, d'une ou de plusieurs séquences à faible abondance nucléotidique, qui diffèrent d'une séquence à forte abondance nucléotidique, par la présence d'un ou de plusieurs changements de base simple et par des insertions ou délétions. Il est possible d'enlever la séquence de type sauvage à forte abondance nucléotidique, de manière sélective, à l'aide d'une conversion analogique très précise par réaction en chaîne de la polymérase, laquelle est facilitée par des conditions tampons optimales, afin de créer un site d'endonucléase de restriction, dans le gène de type sauvage à forte abondance nucléotidique, mais pas dans le gène mutant à faible abondance nucléotidique. Ce processus permet la digestion de l'ADN à forte abondance nucléotidique. Ultérieurement, on amplifie et on détecte l'ADN mutant à faible abondance nucléotidique au moyen d'un dosage de réaction de détection par la ligase. L'invention concerne également une trousse permettant l'exécution de cette procédure.
Barany Francis
Bergstrom Donald E.
Day Joseph P.
Hammer Robert P.
Cornell Research Foundation Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Louisiana State University
Purdue Research Foundation
LandOfFree
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