C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) A61K 31/70 (2006.01) A61K 38/18 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C07K 14/475 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 15/18 (2006.01)
Patent
CA 2186496
A modified form of KL, the ligand for the c-kit proto-oncogene, has been prepared wherein the protein is stabilized by an intermolecular covalent linkage. The protein can be prepared by expression of a recombinant protein wich is dissolved in denaturant and refolded under conditions resulting in a disulfide linked dimer. Examples demonstrate the purification and characterization of this disulfide-linked cysteine dimer kit ligand (KL-CD) which contains at least one intermolecular disulfide bond and has at least ten-fold greater activity in promoting cell poliferation than native, non-covalently linked KL, as measured in in vitro assays. The figure shows the proliferative activity of murine KL,NC, murine KL-CD, murine KL-Ig fusion, and human KL-Ig fusion on an MO7e cell line.
L'invention concerne une forme modifiée de KL, ligand pour le proto-oncogène c-kit, dans laquelle la protéine est stabilisée par une liaison de covalence intermoléculaire. La protéine peut être préparée par expression d'une protéine recombinée, dissoute dans un agent dénaturant et repliée dans des conditions permettant de parvenir à un dimère lié à un disulfure. Des exemples illustrent la purification et la caractérisation de ce kit ligand de dimère de cystéine lié à un disulfure (KL-CD) contenant au moins un pont disulfure intermoléculaire et présentant une activité favorisant la prolifération cellulaire au moins dix fois supérieure à celle des KL natifs, non liés par covalence, comme l'ont montré les mesures effectuées dans les techniques in vitro. La figure 9 présente l'activité proliférative du KL-NC murin, du KL-CD murin, de la fusion de KL-Ig murin et de la fusion de KL-Ig humain sur une lignée cellulaire MO7e.
Lobell Robert B.
Nocka Karl H.
Cytomed Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1994510