C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) B01D 57/02 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01)
Patent
CA 2240681
The present invention refers to the use of multiple gradients (of chemical denutarants, thermal denaturants and of porosity of the gel matrix) for the separation of DNA fragments, amplified by PCR, normal or carrying point mutations, by zone electrophoresis on gel slabs or by capillary electrophoresis in presence of viscous polymer solutions (linear or branched). Such method can be extended to the analysis of mutations in proteins and to the optimization of, e.g., chiral separations in capillaries. The invention includes the use of binary gradients (chemical and porosity gradients or thermal and porosity gradients) or the simultaneous use of 3 gradients for point mutations having a very high melting point. In the case of capillary electrophoresis, the invention extends also to the use of batteries of capillaries, for the simultaneous analysis of a number of samples. Additionally, the invention includes the detection of DNA fragments (or of proteins and other analytes) by laser-induced fluorescence detection and the possibility of operating, in capillary electrophoresis, with mixed polymer solutions and with polyacrylamides obtained with monomers highly resistant to hydrolysis.
L'invention concerne l'utilisation de gradients multiples (d'agents de dénaturation chimiques ou thermiques et de porosité de la matrice de gel) afin de séparer des fragments d'ADN, amplifiés par PCR, normaux ou portant des mutations ponctuelles, par électrophorèse localisée sur des plaques de gel ou par électrophorèse capillaire en présence de solutions polymères visqueuses (linéaires ou ramifiées). Ce procédé peut également être appliqué à l'analyse de mutations dans des protéines, ainsi qu'à l'optimisation de séparations chirales, par exemple, dans des capillaires. L'invention concerne également l'utilisation de gradients binaires (gradients chimiques et de porosité ou gradients thermiques et de porosité) ou l'utilisation simultanée de trois gradients pour des mutations ponctuelles dont le point de fusion est très élevé. Dans le cas d'électrophorèse capillaire, l'invention concerne également l'utilisation de batteries de capillaires, afin d'analyser simultanément plusieurs spécimens. L'invention concerne encore la détection de fragments d'ADN (ou de protéines et d'autres analytes) au moyen de la fluorescence provoquée par laser, ainsi que la possibilité d'utiliser, en électrophorèse capillaire, des solutions polymères mixtes et des polyacrylamides obtenus avec des monomères extrêmement résistants à l'hydrolyse.
Gelfi Cecilia
Righetti Pier Giorgio
Gelfi Cecilia
Kirby Eades Gale Baker
Righetti Pier Giorgio
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1502104