C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) A61K 39/36 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C07K 14/415 (2006.01) C12N 15/29 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2181142
Screening of a Kentucky Bluegrass pollen-.lambda.gt11 library with sera from patients allergic to grass pollen led to the identification of a partial cDNA clone, KBG51. Nucleotide sequence analysis of KBG51 indicated that the polypeptide encoded by this cDNA is different from that of the known recombinant grass pollen allergens. Using murine antiserum to a GST-KBG51 fusion protein, produced with aid of pGEX-2T-1 expression system, two polypeptides of about 30 and 59 KDa in size, were detectable in SDS-PAGE immunoblot analysis of KBG pollen proteins. The reactivity of this antiserum, with a number of polypeptides, which ranged in size from 29.5 to 115 kDa, from pollen extracts of several grasses, birch, ragweed and parietaria and the hybridization of RT-PCR products from various pollens with ?diolabelled KBG51-cDNA,demonstrated the cross-reactivity (CR) of this AL with other pollen ALs. Because of the broad CR, the protein(s) corresponding to KBG51 has been designated as CRAL51. Analysis by ELISA using sera of about 1000 individuals worldwide who were allergic to pollens demonstrated that individuals from a variety of geographical areas possessed IgE antibodies that recognized the GST-KBG51 fusion protein. On the basis of these findings, CRAL51 represents a member of a family of highly cross-reactive ALs in plant pollens.
Le criblage d'une banque de pollen-.lambda.gt11 de pâturin des prés avec des sérums provenant de patients allergiques au pollen des graminées a permis d'identifier un clone d'ADNc partiel, le KBG51. L'analyse de la séquence nucléotidique de KBG51 a révélé que le polypeptide codé par cet ADNC est différent de celui des allergènes du pollen des graminées recombinés connus. On a détecté deux polypeptides d'environ 30 et 59 kDa dans l'analyse par immunotransfert SDS-PAGE des protéines de pollen de KBG en utilisant un antisérum murin dirigé contre la protéine de fusion de GST-KBG51 produite à l'aide du système d'expression pGEX-2T-1. La réactivité de cet antisérum, avec un certain nombre de polypeptides de 29,5 à 115 kDa d'extraits de pollen de plusieurs graminées, du bouleau, de l'ambrosia et de la pariétaria, ainsi que l'hybridation des produits d'amplification RT-PCR de divers pollens avec de l'ADNc-KBG51 radiomarqué a démontré la réactivité croisée de cet AL avec d'autres Als de pollen. De par sa (leur) réactivité croisée importante, la(les) protéine(s) correspondant à KBG51 est (sont) désignée(s) par CRAL51. La technique ELISA dans laquelle des sérums d'environ 1000 personnes allergiques aux pollens dans le monde entier a démontré que les individus provenant de plusieurs zones géographiques possèdent des anticorps IgE reconnaissant la protéine de fusion GST-KBG51. Ces découvertes ont permis de conclure que CRAL51 représente une membre de la famille d'ALs à réactivité croisée élevée dans les pollens de plantes.
Mohapatra Shyam S.
Sehon Alec H.
Sim & Mcburney
University Of Manitoba
LandOfFree
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