C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2253642
The subject invention provides processes and kits for detecting encysted forms of protozoa, particularly Cryptosporidium and Giardia, that are viable and infectious. To determine viability, cysts or oocysts are heated to a temperature that induces transcription of heat shock protein (HSP) genes. Alternatively, to determine infectivity the encysted forms are inoculated onto susceptible cell cultures. The viability or infectivity of the encysted forms can be determined by synthesizing a cDNA from an induced HSP RNA template using a primer that is specific for particular genus or species of protozoa, followed by enzymatic amplification of the cDNA. Alternatively, infectivity can be determined by amplifying HSP DNA from infected cells using a primer pair that is specific for a particular genus or species of protozoa. Amplified HSP DNA can be detected using probes that are specific for a protozoan species of interest, such as the human pathogens C. parvum and G. lamblia. Moreover, both Cryptosporidium and Giardia can be detected simultaneously by using two primer pairs in a multiplex amplification reaction.
Procédés et kits permettant de détecter des formes enkystées de protozoaires, en particulier Cryptosporidium et Giardia, qui sont viables et infectieuses. Pour déterminer la viabilité, on chauffe des kystes et des ookystes à une température qui induit la transcription de gènes de protéine de choc thermique (HSP). Alternativement, pour déterminer l'infectivité, les formes enkystées sont inoculées sur des cultures cellulaires susceptibles. La viabilité ou l'infectivité des formes enkystées peut être déterminée par synthèse d'un ADNc provenant d'une matrice d'ARN d'HSP induit, à l'aide d'une amorce spécifique au genre ou à l'espèce particuliers de protozoaires, suivi par l'amplification enzymatique de l'ADNc. Alternativement, on peut déterminer l'infectivité en amplifiant l'ADN d'HSP provenant de cellules infectées à l'aide d'une paire d'amorces qui est spécifique à un genre ou une espèce particuliers de protozoaires. L'ADN d'HSP amplifié peut être détecté à l'aide de sondes spécifiques à une espèce protozoaire étudiée, telle que les pathogènes humains C. parvum et G. Lamblia. De plus, on peut détecter simultanément Cryptosporidium et Giardia en utilisant deux paires d'amorces dans une réaction d'amplification multiplex.
de Leon Ricardo
Rochelle Paul A.
Gowling Lafleur Henderson Llp
The Metropolitan Water District Of Southern California
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1745641