C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/57 (2006.01) C07K 14/60 (2006.01) C12N 9/48 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2174525
The invention provides customized proteases (i.e. mutant enzymes), e.g. carboxypeptidase Y, methods of making customized proteases, as well as methods of using customized proteases. The customized proteases of the invention are derived from the known proteases. Altered transacylation reactions include the capability to perform transacylation reactions not substantially catalyzed by the known protease or the capability to perform transacylation reactions with improved yields, or both. The methods of the invention provide for customized proteases through site specific or random mutagenesis of the active site amino acids of the known proteases. The invention also provide for methods of using the customized proteases to prepare a preselected transacylation products. The preselected transacylation products produced can be modified by substitution at the N- or C-terminal with nucleophiles such as L-amino acids, D-amino acids, amino acid amides, and radioactive amino acids.
L'invention se rapporte à des protéases particularisées (en d'autres termes des enzymes mutantes), par exemple la carboxypeptidase Y, à des procédés de production de ces protéases ainsi qu'à des procédés d'utilisation de ces dernières. Ces protéases particularisées sont dérivées des protéases connues. Lesdites protéases présentent l'aptitude à effectuer des réactions de transacylation modifiées, y compris des réactions de transacylation qui ne sont généralement pas catalysées par les protéases connues ou des réactions de transacylation à rendements améliorés, ou encore les deux types de réactions. Les procédés selon l'invention permettent d'obtenir des protéases particularisées par la mutagénèse dirigée ou aléatoire des aminoacides du site actif des protéases connues. L'invention se rapporte également à des procédés d'utilisation des protéases particularisées pour préparer des produits de transacylation présélectionnés. Les produits de transacylation ainsi obtenus peuvent être modifiés par la substitution, au niveau de l'extrémité N ou C, de nucléophiles tels que des L-aminoacides, des D-aminoacides, des amides d'aminoacide et des aminoacides radioactifs.
Breddam Klaus
Kielland-Brandt Morten C.
Mortensen Uffe Hasbo
Olesen Kjeld Ove
Stennicke Henning Ralf
Bereskin & Parr
Carlsberg A/s
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1376076