Cytokine-free culture of dendritic cells

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 5/08 (2006.01) A61K 35/14 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)

Patent

CA 2263722

A method for producing human dendritic cells for therapeutic purposes which allows culture-deriving dendritic cells using no cytokines, or reduced cytokines. The method involves culturing mononuclear cells from blood or bone marrow in a medium containing at least one agent such as a calcium ionophore, e.g. A23187, theophylline, protaglandin E1, dibutyryl cyclic AMP, Vitamin D3, Vitamin E, retinoic acid, or a fatty acid. The culture is maintained for a sufficient time, typically 4 - 14 days, to produce a culture enriched for dendritic cells, as evidenced by at least about 2.5 % of total cells exhibiting dendritic cell processes, or a dendritic cell antigen such as CD80, CD86, or CD1a. Also provided is a method to produce antigen-specific human T- cells by pulsing the dendritic cells obtained by the method of the invention with an antigen such as a viral, tumor, bacterial, or cell surface antigen, and then co-culturing T-cells with the antigen-pulsed dendritic cells. Useful for treatment of viral or bacterial infections, useful as a cancer vaccine, useful to induce tolerance of allo- or xeno-graft.

L'invention porte sur un procédé de production de cellules dendritiques humaines à des fins thérapeutiques à partir de cultures sans cytokines ou avec peu de cytokines. Ledit procédé consiste à cultiver des cellules mononucléaires sanguines ou médullaires dans un milieu contenant au moins un agent tel que: un ionophore de calcium, (par exemple l'A23187), de la théophylline, de la prostaglandine E1, de l'AMP cyclique dibutyryle, de la vitamine D3, de la vitamine E, de l'acide rétinoïque, ou un acide gras. La culture est maintenue pendant un temps suffisant, par exemple de 4 à 14 jours, pour la production d'une culture enrichie en cellules dendritiques au moins 2,5 % du total des cellules présentant le processus des cellules dendritiques, ou un antigène de cellules dendritiques tel que le CD80, le CD86, ou le CD1a. L'invention porte également sur un procédé de production de cellules T humaines spécifiques d'un antigène qui consiste à pulser les cellules dendritiques obtenues par le susdit procédé à l'aide d'un antigène viral, tumoral ou bactérien ou de la surface de cellules, puis à co-cultiver les cellules T et les cellules dendritiques à impulsion antigénique. Les cellules dendritiques ainsi obtenues sont utiles pour le traitement d'infections virales ou bactériennes, en tant que vaccin contre le cancer, ou pour l'induction de tolérance aux allo ou xéno-greffes.

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