C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/32 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12Q 1/00 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) C12Q 1/18 (2006.01) C12Q 1/26 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)
Patent
CA 2481548
Disclosed are a method and a corresponding kit for determining the cytotoxicity of a test agent. The method includes the steps of adding a pre- determined amount of the test agent to a vessel containing living cells in culture medium. The cells are then incubated for a pre-determined amount of time. To the cells and culture medium is then added a reagent mixture that is non-toxic to the living cells. In the preferred embodiment, the reagent mixture contains a solvent, a dye, an electron transfer agent, a substrate for a cytoplasmic enzyme having a half-life greater than two hours and NAD+. The contents of the vessel are then measured for production of the reduced state of the dye, the production of the reduced state of the dye being caused by a cytoplasmic enzyme specific for the substrate in the reagent mixture. In the preferred embodiment, the production of the reduced state of the dye is caused by lactate dehydrogenase released from dead and dying cells within the vessel. The kits contain components necessary for performing the method.
L'invention concerne une méthode et une trousse correspondante permettant de déterminer la cytotoxicité d'un agent test. Cette méthode comprend les étapes consistant à ajouter une dose prédéterminée de l'agent test dans un récipient contenant des cellules vivantes dans un milieu de culture. Ces cellules sont ensuite incubées pour une durée prédéterminée. A ces cellules et à ce milieu de culture est ensuite ajouté un mélange de réactifs non toxique pour les cellules vivantes. Dans un mode de réalisation préféré, le mélange de réactifs contient un solvant, un colorant, un agent de transfert d'électrons, un substrat pour une enzyme cytoplasmique présentant une demi-vie supérieure à deux heures et du NAD+. Le contenu de ce contenant est ensuite mesuré pour une production de l'état réduit du colorant, la production de l'état réduit du colorant étant provoquée par une enzyme cytoplasmique spécifique au substrat du mélange de réactifs. Dans le mode de réalisation préféré, la production de l'état réduit du colorant est provoquée au moyen de lactate déshydrogénase libérée à partir de cellules mortes et de cellules sur le point de mourir, situées à l'intérieur du contenant. Ces trousses contiennent des constituants nécessaires pour la mise en oeuvre de cette méthode.
Moravec Richard A.
Riss Terry L.
Borden Ladner Gervais Llp
Promega Corporation
LandOfFree
Cytotoxicity assay does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Cytotoxicity assay, we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Cytotoxicity assay will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1763743