De novo polynucleotide synthesis using rolling templates

Details De novo polynucleotide synthesis using rolling templates De novo polynucleotide synthesis using rolling templates

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 19/00 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2302533

Disclosed is a method for synthesizing polynucleotide molecules such as genes or gene segments. A primer having 5' and 3' ends is incubated with a relatively shorter template having a 5' region non-complementary to the primer, a 3' region complementary to the 3' end of the primer, and a non- reactive 3' terminus to allow the 3' region of the template to anneal to the primer. The annealed product is reacted with at least one nucleotide in the presence of the template-dependent polynucleotide polymerase to produce a primer extended at its 3' end by at least one nucleotide complementary to the 5' region of the template. After being dissociated from the template, the extended primer is further extended by repeating this cycle for sufficient cycles, wherein the templates and enzymes may differ from cycle to cycle, to obtain the object polynucleotide. Template libraries and kits containing them are also disclosed.

L'invention concerne un procédé utile pour la synthèse de molécules de polynucléotides telles que des gènes ou des segments de gène. Une amorce qui comporte des extrémités 5' et 3' est incubée avec un modèle relativement plus court comportant une région 5' non complémentaire à l'amorce, une région 3' complémentaire à l'extrémité 3' de l'amorce, et une extrémité 3' non réactive pour permettre à la région 3' du modèle de fusionner avec l'amorce. Le produit fusionné est mis à réagir avec au moins un nucléotide en présence d'une polynucléotide polymérase dépendant du modèle afin de produire une amorce étendue à son extrémité 3' au moyen d'au moins un nucléotide complémentaire à la région 5' du modèle. Après que l'amorce étendue s'est dissociée du modèle, celle-ci est étendue davantage par répétition du cycle selon un nombre suffisant de cycles, les modèles et les enzymes pouvant différer d'un cycle à l'autre, en vue d'obtenir le polynucléotide voulu. Des banques de modèles et des trousses contenant ceux-ci sont également décrites.

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