C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/09 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2421012
To design and construct a transcription template for synthesizing a cell-free protein which is commonly usable, has a high translation template activity and can be easily constructed, a polynucleotide comprising a base sequence inherent to an individual vector capable of forming a complementary strand with a base sequence existing between the transcriptional terminator sequence of a marker gene (for example, a drug-tolerance gene) of the vector and Ori is provided as a 3'-terminal PCR primer, while two types of primers satisfying the requirement of not undergoing transcription from a DNA constructed by using a single primer alone, involving a polynucleotide having a sequence complementary to a base sequence containing a part of the promoter function site from the 5'-terminus of a promoter and another polynucleotide having a sequence complementary to a base sequence containing a part of the RNA polymerase recognition site from the 3'-terminus of the promoter are provided as primers for 5'-terminal PCR. Further, a method of constructing a transcription template, etc. by using them is provided.
L'invention concerne la conception et la construction d'un modèle de transcription utilisé dans la synthèse d'une protéine acellulaire, couramment utilisé, à haute activité de modèle de traduction, et pouvant être facilement construit. On utilise comme amorce PCR de terminaison 3' un polynucléotide comprenant une séquence de base inhérente à un vecteur individuel, pouvant former un brin complémentaire avec une séquence de base existant entre la séquence de terminaison transcriptionnelle d'un gène marqueur (par exemple un gène de tolérance à un médicament) du vecteur et l'Ori, alors qu'on utilise comme amorces PCR de terminaison 5' deux types d'amorces ne nécessitant pas de transcription d'un ADN construit à l'aide d'une seule amorce simple, avec un polynucléotide présentant une séquence complémentaire à une séquence de base contenant une partie du site fonctionnel de la terminaison 5' d'un promoteur et un autre polynucléotide présentant une séquence complémentaire à une séquence de base contenant une partie du site de reconnaissance d'un ARN polymérase de la terminaison 3' du promoteur. L'invention concerne également une méthode de construction d'un modèle de transcription, etc., utilisant lesdits polynucléotides.
Endo Yaeta
Ogasawara Tomio
Sawasaki Tatsuya
Cellfree Sciences Co. Ltd.
Endo Yaeta
Moffat & Co.
LandOfFree
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