Detecting specific nucleotide sequences

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2426812

Oligonucleotide primers, each labeled with a molecular energy transfer pair, including an energy donor and an energy acceptor, are used to detect the presence of one or more identifying nucleotide sequences. Two sequence- specific oligonucleotide primers, one specific for a first identifying sequence and the other for the second identifying sequence, together with a reverse primer, are employed in a polymerase chain reaction mixture which contains a nucleic acid template. Using only its complementary identifying sequence as a template, each sequence-specific primer directs amplification. Resultant PCR products, representing the first and the second identifying sequence, are detected via PCR amplification which uses two MET-labeled primers, each specific for the PCR product representing either the first or the second identifying sequence, together with another primer that is complementary to the PCR products representing both identifying sequences.

La présente invention se rapporte à des amorces oligonucléotidiques, marquées chacune au moyen d'une paire assurant un transfert d'énergie moléculaire, ladite paire comprenant un donneur d'énergie et un accepteur d'énergie. Lesdites amorces oligonucléotidiques sont utilisées pour détecter la présence d'une ou de plusieurs séquences nucléotidiques d'identification. Deux amorces oligonucléotidiques spécifiques d'une séquence, l'une spécifique d'une première séquence d'identification et l'autre de la deuxième séquence d'identification, ainsi qu'une amorce inverse, sont employées dans un mélange produit par réaction en chaîne de la polymérase (PCR) qui contient une matrice d'acide nucléique. En utilisant seulement sa séquence d'identification complémentaire comme matrice, chaque amorce spécifique d'une séquence dirige l'amplification. Les produits de la PCR qui en résultent, représentant la première et la deuxième séquence d'identification, sont détectés par amplification PCR qui utilise deux amorces marquées par transfert d'énergie moléculaire, chacune étant spécifique du produit de la PCR représentant soit la première, soit la deuxième séquence d'identification, ainsi qu'une autre amorce qui est complémentaire des produits de la PCR représentant les deux séquences d'identification.

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