B - Operations – Transporting – 04 – B
Patent
B - Operations, Transporting
04
B
B04B 7/08 (2006.01) B01L 3/14 (2006.01) C12M 1/00 (2006.01) C12M 1/26 (2006.01) C12Q 1/24 (2006.01) G01N 15/04 (2006.01) G01N 21/07 (2006.01)
Patent
CA 2322202
A method for separating microorganisms, especially infectious agents, from a mixture by two-dimensional centrifugation on the basis of sedimentation rate and isopycnic banding density, for sedimenting such microorganisms through zones of immobilized reagents to which they are resistant, for detecting banded particles by light scatter or fluorescence using nucleic acid specific dyes, and for recovering the banded particles in very small volumes for characterization by mass spectrometry of viral protein subunits and intact viral particles, and by fluorescence flow cytometric determination of both nucleic acid mass and the masses of fragments produced by restriction enzymes. The method is based on the discovery that individual microorganisms, such as bacterial and viral species, are each physically relatively homogeneous, and are distinguishable in their biophysical properties from other biological particles, and from non-biological particles found in nature. The method is useful for distinguishing infections, for identifying known microorganisms, and for discovering and characterizing new microorganisms. The method provides very rapid identification of microorganisms, and hence allows a rational choice of therapy for identified infectious agents. A particularly useful application is in clinical trials of new antibiotics and antivirals, where it is essential to identify at the outset individuals infected with the targeted infectious agent.
La présente invention concerne un procédé de séparation par centrifugation bidimensionnelle de micro-organismes, en particulier d'agents infectieux, contenu dans un mélange sur la base de la vitesse de sédimentation et de la densité de la centrifugation isopycnique, afin de procéder à la sédimentation de ces micro-organismes à travers des zones de réactifs immobilisés auxquels ils résistent, puis à la détection de particules ainsi séparées par diffusion de lumière ou par fluorescence en utilisant des colorants spécifiques aux acides nucléiques, pour récupérer ensuite ces particules en bandes en très petits volumes en vue de leur caractérisation par spectrométrie de masse de sous unités de protéines virales et de particules virales intactes, et par détermination cytométrique du flux fluorescent, à la fois de la masse d'acides nucléiques et des masses de fragments produits par des enzymes de restriction. Ce procédé repose sur la découverte selon laquelle les micro-organismes individuels, tels que les espèces bactériennes et virales, sont physiquement homogènes entre elles, et se distinguent par leurs propriétés biophysiques des autres particules biologiques, et des autres particules non biologiques existants à l'état naturel. Par ailleurs, ce procédé est utile pour distinguer les infections, pour identifier les micro-organismes connus, et pour découvrir et caractériser les nouveaux micro-organismes. Ce procédé permet également une identification très rapide des micro-organismes et permet ainsi un choix rationnel de thérapie contre les micro-organismes ainsi identifiés. Enfin, cette invention concerne une application particulièrement utile dans les essais cliniques des nouveaux antibiotiques et antiviraux où il est essentiel d'identifier d'abord les sujets infectés par les agents infectieux ciblés.
Anderson N. Leigh
Anderson Norman G.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Large Scale Proteomics Corporation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1462136