Detection of bacteria and fungi

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/04 (2006.01)

Patent

CA 2758783

A method of detecting a ligase expressing micro-organism in a sample comprises steps of treating the sample under conditions that inhibit the activity of ATP-dependent ligase from mammalian cells but which do not inhibit the activity of the microbial ligases, contacting the sample or a portion of the sample with a nucleic acid molecule which acts as a substrate for ligase activity in the sample, incubating the thus contacted sample under conditions suitable for ligase activity; and specifically determining the presence and/or the amount of a ligated nucleic acid molecule resulting from the action of the ligase on the substrate nucleic acid molecule to indicate the presence of the ligase expressing micro- organism. The micro-organism may be a fungus or a bacterium or both. High pH conditions may be employed to inactivate mammalian ligases. Related kits are described.

L'invention porte sur un procédé de détection d'un microorganisme exprimant une ligase dans un échantillon comprenant les étapes consistant à traiter l'échantillon dans des conditions qui inhibent l'activité d'une ligase dépendante de l'ATP provenant de cellules de mammifère mais qui n'inhibent pas l'activité de ligases microbiennes, mettre en contact l'échantillon ou une partie de l'échantillon avec une molécule d'acide nucléique qui agit en tant que substrat d'une activité ligase dans l'échantillon, incuber l'échantillon mis en contact de cette façon dans des conditions appropriées pour une activité ligase ; et déterminer spécifiquement la présence et/ou la quantité d'une molécule d'acide nucléique ligaturée résultant de l'action de la ligase sur la molécule d'acide nucléique substrat pour indiquer la présence du micro-organisme exprimant une ligase. Le microorganisme peut être un champignon ou une bactérie ou les deux. Des conditions de pH élevé peuvent être employées pour inactiver les ligases de mammifère. L'invention porte également sur des coffrets apparentés.

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