C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2075858
The invention relates to a method for detection of a specific nucleic acid sequence which comprises forming a reaction mixture by combining (1) a sample suspected of containing a nucleic acid; (2) a probe/enzyme donor polypeptide conjugate comprising (a) an enzyme donor polypeptide sequence comprising a .beta.-galactosidase fragment; and (b) a single-stranded oligonucleotide sequence attached to (a) and capable of hybridizing with said nucleic acid; (3) an enzyme acceptor polypeptide capable of forming an active enzyme upon complementation with said enzyme donor-fragment; and (4) a substrate for .beta.-galactosidase; and detecting hybridization of said probe/enzyme donor conjugate to said sample nucleic acid to form a double strand-specific sequence by determining theamount or rate of enzyme activity on said substrate in said reaction mixture. The method can also include a "proof reading" function by incubating the hybridized probe with at least one double-strand specific, sequence-specific restriction endonuclease. Novel kits for use in carrying out the method are also included.
L'invention concerne une méthode de détection d'une séquence d'acides nucléiques spécifiques qui comprend la formation d'un mélange réactionnel par combinaison 1) d'un échantillon que l'on présume contenir un acide nucléique; 2) d'un conjugué sonde/polypeptide donneur d'enzyme comprenant a) une séquence de polypeptide donneur d'enzyme comprenant un fragment de bêta-galactosidase; et b) une séquence d'oligonucléotide simple brin attachée à a) et capable de s'hybrider avec ledit acide nucléique; 3) d'un polypeptide accepteur d'enzyme capable de former une enzyme active après complémentation par ledit fragment donneur d'enzyme; et 4) d'un substrat de la bêta-galactosidase; et la détection de l'hybridation dudit conjugué sonde/donneur d'enzyme audit acide nucléique échantillon pour former une séquence double brin spécifique en déterminant la quantité ou le taux d'activité de l'enzyme sur ledit substrat dans ledit mélange réactionnel. La méthode peut également inclure une fonction « correction d'épreuve » si l'on incube la sonde hybridée avec au moins une endonucléase de restriction spécifique des doubles brins et spécifique de la séquence. De nouvelles trousses pour l'application de la méthode sont également fournies.
Fetherstonhaugh & Co.
Microgenics Corporation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1855518