C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2540508
The present invention provides methods for determining the presence of immobilized nucleic acid employing unsymmetrical cyanine dyes that are derivatives of thiazole orange, a staining solution and select fluorogenic compounds that are characterized as being essentially non-genotoxic. The methods comprise immobilizing nucleic acid, single or double stranded DNA, RNA or a combination thereof, on a solid or semi solid support, contacting the immobilized nucleic acid with an unsymmetrical cyanine dye compound and then illuminating the immobilized nucleic acid with an appropriate wavelength whereby the presence of the nucleic acid is determined. The cyanine dye compounds are typically present in an aqueous staining solution comprising the dye compound and a tris acetate or tris borate buffer wherein the solution facilitates the contact of the dye compound and the immobilized nucleic acid. Typically the solid or semi-solid support is selected from the group consisting of a polymeric gel, a membrane, an array, a glass bead, a glass slide, and a polymeric microparticle. Preferably, the polymeric gel is agarose or polyacrylamide. The methods employing the non-genotoxic compounds represent an improvement over commonly used methods employing ethidium bromide wherein the present methods retain the advantages of ethidium bromide, ease of use and low cost, but without the disadvantageous, known mutagen requiring special handling and waste procedures.
L'invention concerne des méthodes de détermination de la présence d'acide nucléique immobilisé, au moyen de colorants cyanine asymétriques dérivés de l'orange thiazole, d'une solution de coloration et de composés fluorogènes extra qui se caractérisent en ce qu'ils sont sensiblement non génotoxiques. Les méthodes de l'invention consistent à immobiliser de l'acide nucléique, de l'ARN, de l'ADN simple ou double brin ou une combinaison de ceux-ci, sur un support solide ou semi-solide; à mettre l'acide nucléique immobilisé en contact avec un composé de colorant cyanine asymétrique et à éclairer l'acide nucléique immobilisé avec une longueur d'onde appropriée, ce qui permet la détermination de la présence d'acide nucléique. Les composés de colorant cyanine sont généralement présents dans une solution de coloration aqueuse comprenant le composé de colorant et une solution tampon de tris acétate et de tris borate, la solution facilitant le contact du composé de colorant et de l'acide nucléique immobilisé. Généralement, le support solide ou semi-solide est choisi dans le groupe formé d'un gel polymère, d'une membrane, d'un réseau, d'une bille de verre, d'une lame de verre et d'une microparticule polymère. Le gel polymère est de préférence de l'agarose ou du polyacrylamide. Les méthodes utilisant des composés non génotoxiques représentent une amélioration par rapport aux méthodes utilisées couramment utilisant du bromure d'éthidium. Les procédés de l'invention présentent l'avantage d'utiliser du bromure d'éthidium, d'être facile à utiliser et économiques, mais sans l'inconvénient de l'utilisation d'un mutagène connu nécessitant des procédures de manipulation et de mise au rebut spéciales.
Beaudet Matthew P.
Cox Gregory W.
Yue Stephen
Mbm Intellectual Property Law Llp
Molecular Probes Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2088913