C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2220467
Disclosed is a method for detecting one or more mismatches in a test nucleic acid which preferentially hybridizes to a reference nucleic acid. The method involves a) providing the test nucleic acid in its single-stranded form; b) providing the reference nucleic acid immobilized on a solid support, the reference nucleic acid being in its single-stranded form and the solid support being compatible with a slot in an electrophoretic gel; c) contacting the single-stranded test nucleic acid with the single-stranded immobilized reference nucleic acid under conditions allowing duplex formation, whereby the duplex is immobilized on the solid support; d) contacting the immobilized duplex with a resolvase (for example, T4 endonuclease VII) capable of recognizing at least one single base pair mismatch in the duplex under conditions which permit the resolvase to cleave the duplex; e) inserting the solid support into the slot of the electrophoretic gel under conditions sufficient to release all or a cleaved portion of the immobilized duplex into the slot; and f) analyzing the released product by gel electrophoresis, the presence of a cleavage product being an indication of a mismatch in the test nucleic acid.
L'invention a pour objet un procédé pour détecter une ou plusieurs erreurs d'appariement dans un acide nucléique test qui s'hybride, de préférence, à un acide nucléique étalon. Ce procédé consiste: a) à produire l'acide nucléique test sous une forme à simple brin; b) à produire l'acide nucléique étalon, sous une forme à simple brin, immobilisé sur un support solide, ce support solide étant compatible avec une fente dans un gel d'électrophorèse; c) à mettre l'acide nucléique de test à simple brin en contact avec l'acide nucléique de référence, à simple brin, immobilisé, dans des conditions assurant la formation d'une double hélice, ce qui permet d'immobiliser la double hélice sur le support solide; d) à mettre la double hélice immobilisée en contact avec une résolvase (par exemple, T4 endonucléase VII) pouvant reconnaître au moins une seule erreur d'appariement de paires de bases dans la double hélice dans des conditions permettant à la résolvase de provoquer le clivage de la double hélice; e) à insérer le support solide dans la fente du gel d'électrophorèse dans des conditions suffisantes pour libérer la totalité ou une partie clivée de la double hélice immobilisée dans la fente; et f) à analyser le produit libéré par l'électrophorèse sur gel, la présence d'un produit de clivage indiquant une erreur d'appariement dans l'acide nucléique de test.
Lagerkvist Arild
Landegren Ulf
Lagerkvist Arild
Landegren Ulf
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1942139