C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2230388
Disclosed is a method for detecting one or more mismatches between a first and a second nucleic acid, the first and second nucleic acids being capable of preferentially hybridizing. The method involves: a) providing the first nucleic acid in its single-stranded form, the first nucleic acid being bound to the first member of a specific binding pair; b) providing the second nucleic acid in its single-stranded form, the second nucleic acid being bound to a detectably labelled reagent; c) contacting the first nucleic acid with the second nucleic acid under conditions allowing heteroduplex formation; d) contacting the product of step (c) with a magnetic bead to which is bound the second member of the specific binding pair under conditions allowing complex formation between the first and the second members of the specific binding pair; e) applying a magnetic field to the mixture to facilitate separation of the magnetic bead from the remainder of the product of step (c); f) contacting the magnetic bead-bound nucleic acid with a resolvase capable of recognizing at least one single base pair mismatch in a heteroduplex, under conditions which permit the resolvase to cleave the heteroduplex; and g) analyzing the product of step (f), the presence of a cleavage product being an indication of a mismatch between the first and second nucleic acids.
L'invention concerne un procédé permettant de détecter un ou plusieurs mésappariements entre un premier et un second acide nucléique, tous deux capables d'hybridation préférentielle. Le procédé comprend les étapes suivantes: a) on prend le premier acide nucléique sous sa forme monocaténaire, lequel est lié au premier élément d'une paire de liaison spécifique; b) on prend le second acide nucléique sous sa forme monocaténaire, lequel est lié à un réactif marqué de façon à pouvoir être détecté; c) on met le premier acide nucléique en contact avec le second acide nucléique dans des conditions permettant la formation d'un hétéroduplex; d) on met le produit de l'étape (c) en contact avec une bille magnétique à laquelle est lié le second élément de la paire de liaison spécifique, dans des conditions permettant la formation d'un complexe entre les premier et second éléments de la paire de liaison spécifique; e) on applique un champ magnétique au mélange pour faciliter la séparation de la bille magnétique du reste du produit de l'étape (c); f) on met l'acide nucléique lié au support magnétique en contact avec une résolvase capable de reconnaître au moins un seul mésappariement des paires de bases au sein d'un hétéroduplex, dans des conditions qui permettent à la résolvase de cliver l'hétéroduplex; g) on analyse le produit de l'étape (f), la présence d'un produit de clivage indiquant un mésappariement entre les premier et second acides nucléiques.
Babon Jeff
Cotton Richard G. H.
Huff Anne
Stoerker Jay
Youil Rima
Avitech Diagnostics Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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