C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01)
Patent
CA 2145719
Fluorescence polarization methods for detection of nucleic acid amplification. Afluorescently labelled oligodeoxynucleotide probe is converted from single- to double-stranded form in a target dependent manner during amplification of the target sequence. This conformational change is accompanied by an increase in fluorescence polarization values. The increase in fluorescence polarization can be measured on a transient-state fluorometer in real- time during the amplification reaction without any physical manipulation of the sample. The inventive methods therefore provide a closed, homogeneous system for both amplification of target sequences and detection of amplification. Alternatively, amplification may be detected in the fluorometer after the amplification reaction is completed.
L'invention est constituée par des méthodes utilisant la polarisation de fluorescence pour déterminer l'amplification des acides nucléiques. Une sonde constituée par un oligodéoxynucléotide marqué par fluorescence est convertie d'une structure à un seul brin en une structure à deux brins d'une façon qui dépend de la cible durant l'amplification de la séquence cible. Cette modification de structure est accompagnée d'une augmentation des intensités de polarisation de fluorescence. Cette augmentation peut être mesurée au moyen d'un fluoromètre à états transitoires fonctionnant en temps réel durant la réaction d'amplification sans aucune manipulation physique de l'échantillon. Les méthodes de l'invention procurent donc un système homogène fermé d'amplification des séquences cibles et de détection de cette amplification. L'amplification peut également être détectée dans le fluoromètre une fois la réaction d'amplification terminée.
Linn C. Preston
Nadeau James G.
Walker George T.
Becton Dickinson And Company
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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