C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2591418
A method for detecting a mutation in a target nucleic acid sequence in a sample, the target nucleic acid sequence comprising a first DNA strand and optionally the complementary strand thereof, said method comprising: (a) adding a detection primer to the nucleic acid, wherein the detection primer binds to the first DNA strand at a DNA sequence that comprises the mutation site; (b) extending the detection primer to form second DNA strands that are complementary to the first DNA strand; (c) adding an amplification primer to the nucleic acid, wherein the amplification primer binds to the second DNA strand and / or to the complementary strand, at a position away from the mutation site; (d) extending the amplification primer to form third DNA strands that are complementary to the second DNA strands, and/ or additional copies of the first DNA strand; (e) annealing the DNA strands by complementary base pairing, to form nucleic acid duplexes, wherein if the two strands of the duplex have a mismatched residue at the mutation site, the duplex is a heteroduplex, and. wherein if the two strands of the duplex do not have a mismatched residue at the mutation site, the duplex is a homoduplex; and (d) detecting the presence of heteroduplexes and / or homoduplexes.
L'invention concerne un procédé servant à détecter une mutation dans une séquence d'acides nucléiques cible dans un échantillon, la séquence d'acides nucléiques cible comprenant un premier brin d'ADN et facultativement le brin complémentaire de celui-ci, ledit procédé comprenant les étapes consistant à : (a) ajouter une amorce de détection à l'acide nucléique, ladite amorce de détection liant le premier brin d'ADN au niveau d'une séquence d'ADN qui comprend le site de la mutation ; (b) étendre l'amorce de détection pour former des seconds brins d'ADN qui sont complémentaires au premier brin d'ADN ; (c) ajouter une amorce d'amplification à l'acide nucléique, ladite amorce d'amplification liant le second brin d'ADN et/ou le brin complémentaire, au niveau d'une position éloignée du site de la mutation ; (d) étendre l'amorce d'amplification pour former des troisièmes brins d'ADN qui sont complémentaires aux seconds brins d'ADN et/ou des copies supplémentaires du premier brin d'ADN ; (e) hybrider les brins d'ADN par appariement de bases complémentaires, pour former des duplexes d'acides nucléiques, dans lesquels, si les deux brins du duplex ont un résidu mal apparié au niveau du site de mutation, le duplex est un hétéroduplex et dans lesquels, si les deux brins du duplex n'ont pas un résidu mal apparié au niveau du site de la mutation, le duplex est un homoduplex ; et (d) détecter la présence d'hétéroduplexes et/ou d'homoduplexes.
Borden Ladner Gervais Llp
Health Protection Agency
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2065450