G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/52 (2006.01) C07D 209/08 (2006.01) C07D 239/60 (2006.01) C07D 311/16 (2006.01) C07F 5/00 (2006.01) C07F 5/02 (2006.01) C09B 23/02 (2006.01) C09B 55/00 (2006.01) C09B 57/00 (2006.01) G01N 21/66 (2006.01) G01N 21/76 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2223927
Methods and compositions are provided for determining the potential of a membrane. In one aspect, the method comprises: (a) introducing a first reagent comprising a hydrophobic fluorescent ion capable of redistributing from a first face of the membrane to a second face of the membrane in response to changes in the potential of the membrane, as described by the Nernst equation, (b) introducing a second reagent which labels the first face or the second face of the membrane, which second reagent comprises a chromophore capable of undergoing energy transfer by either (i) donating excited state energy to the fluorescent ion, or (ii) accepting excited state energy from the fluorescent ion, (c) exposing the membrane to radiation; (d) measuring energy transfer between the fluorescent ion and the second reagent, and (e) relating the energy transfer to the membrane potential. Energy transfer is typically measured by fluorescence resonance energy transfer. In some embodiments the first and second reagents are bound together by a suitable linker. In one aspect the method is used to identify compounds which modulate membrane potentials in biological membranes.
La présente invention concerne des procédés et compositions permettant de déterminer les potentiels d'une membrane. Selon un des aspects de l'invention, le procédé consiste: (a) à introduire un premier réactif comprenant un ion fluorescent hydrophobe capable de se redistribuer d'une première face de la membrane vers une seconde face de la membrane en réaction à des modifications des potentiels de la membrane telles qu'elles sont décrites par l'équation de Nernst, (b) à introduire un second réactif qui marque la première face ou la seconde face de la membrane, lequel réactif comprend un chromophore capable de subir un transfert d'énergie, soit (i) en donnant à l'ion fluorescent de l'énergie d'excitation, soit (ii) en acceptant de l'ion fluorescent de l'énergie d'excitation, (c) à exposer la membrane à un rayonnement, (d) à mesurer le transfert d'énergie entre l'ion fluorescent et le second réactif, et (e) à établir la relation entre le transfert d'énergie et le potentiel de la membrane. En l'occurrence, la mesure du transfert d'énergie se fait selon le principe du transfert d'énergie de résonance de fluorescence. Dans certaines réalisations, le premier réactif et le second réactif sont liés ensemble par un liant approprié. Selon un aspect de l'invention, le procédé décrit convient à l'identification de composés capables de moduler les potentiels membranaires des membranes biologiques.
Gonzalez Jesus E. III
Tsien Roger Y.
Mbm Intellectual Property Law Llp
The Regents Of The University Of California
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1843267