C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2501636
A method for detecting the presence of a target nucleic acid sequence in a sample, said method comprising: (a) adding to a sample suspected of containing said target nucleic acid sequence, a fluorescently labelled probe specific for said target sequence, and DNA duplex binding agent which can absorb fluorescent energy from the fluorescent label on the probe bur which does not emit visible light, (b) subjecting the thus formed mixture to an amplification reaction in which target nucleic acid is amplified, (c) subjecting said sample to conditions under which the said probe hybridises to the target sequence, and (d) monitoring fluorescence from said sample. This method can be used for example to monitor amplification reactions such as PCR reactions, such that the amount of target sequence present in the sample may be determined. Additionally or alternatively, it may be used to generate duplex destabilisation data such as melt hyteresis information for amplification monitoring or for detection and quantification of polymorphisms or allelic variation, and so is useful in genetic diagnosis.
Cette invention a trait à une technique de contrôle de la présence d'une séquence nucléotidique cible dans un prélèvement. Cette technique consiste, (a), à ajouter au prélèvement, suspecté de contenir cette séquence nucléotidique cible, une sonde fluorescente marquée spécifique de la séquence, un agent de fixation d'ADN double hélice, capable d'absorber l'énergie fluorescente émanant de la sonde, mais n'émettant pas de lumière visible, (b), à soumettre le mélange ainsi constitué aux effets d'une réaction d'amplification dans laquelle la séquence cible est amplifiée, (c), à soumettre ce prélèvement à des conditions dans lesquelles la sonde s'hybride à la séquence cible et, (d), à contrôler la fluorescence émanant du prélèvement. Il est possible, notamment, d'utiliser cette technique pour contrôler des réactions d'amplification comme la PCR, de sorte qu'il est possible de déterminer l'importance de la séquence cible présente dans le prélèvement. Il est possible, en sus ou en alternance, d'utiliser cette technique pour produire des données de déstabilisation duplex, notamment une information d'hystérésis de fusion aux fins du contrôle de l'amplification ou pour la détection et la quantification de polymorphismes ou de variation allélique, ce qui la rend des plus utile, s'agissant de diagnostic génétique.
Basche Mark
Brown Tom
Lee Martin Alan
Fetherstonhaugh & Co.
The Secretary Of State For Defence
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1777580