C - Chemistry – Metallurgy – 12 – M
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
M
C12M 1/34 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01)
Patent
CA 2484730
In patients having carcinomas tumor cells shed into the blood, enumeration and characterization of these cells offers the opportunity to obtain a "real time" biopsy of the tumor and may improve the management of the disease. The frequency of circulating tumor cells is rare (<1cell/ml) and technology is needed that has sufficient sensitivity and specificity to enumerate and characterize these cells. The present system was developed to provide an immunophenotype, based on fluorescence waveforms as well as images of immunomagnetically-enriched cells. Blood volumes ranging from 7.5-30ml are immunomagnetically enriched for epithelial cells. The sample volume is reduced to 320ul and inserted into an analysis chamber. Upon introduction of the chamber in a magnetic field, the immunomagnetically tagged cells rise out of the sample and align between nickel lines (period 30Ám, space 15Ám) that are present on the viewing surface of the chamber.
Chez des patients qui présentent des cellules tumorales, ou carcinomes, logés dans le sang, l'énumération et la caractérisation de ces cellules offrent la possibilité d'obtenir une biopsie de la tumeur en temps réel et peut permettre d'améliorer la gestion de la maladie. En raison de la faible fréquence des cellules tumorales circulantes (<1 cellule/ml), il est nécessaire de recourir à des techniques suffisamment sensibles et spécifiques pour énumérer et caractériser ces cellules. La présente invention a été mise au point pour déterminer l'immunophénotype, sur la base des formes d'ondes fluorescentes ainsi que des images des cellules enrichies par voie immunomagnétique. Les volumes sanguins compris entre 7,5 et 30 ml sont enrichis immunomagnétiquement pour les cellules épithéliales. Le volume sanguin est réduit à 320 ul et introduit dans une chambre d'analyse. Lorsque la chambre est introduite dans un champ magnétique, les cellules marquées immunomagnétiquement quittent l'échantillon et s'alignent entre les lignes de nickel (période 30 mu m, espace 15 mu m) présentes sur la surface d'observation de la chambre. Un système laser multiple est utilisé pour détecter la fluorescence émise par les cellules marquées et magnétiquement alignées de DAPI, phycoérythrine et allophycocyane. Des instruments optiques à disque compact sont utilisés pour maintenir l'alignement et la mise au point des faisceaux laser sur les lignes de nickel pendant le mouvement de la chambre. La chambre est balayée à 10 mm/sec et l'ensemble de la chambre est analysé en 5 minutes environ. Les signaux fluorescents obtenus des événements fournissent un immunophénotype similaire à celui d'un cytomètre de flux. Les formes d'ondes fluorescentes améliorent la caractérisation des événements et ajoutent à la classification les cellules et les débris cellulaires comme fond. Etant donné que les emplacements des cellules sont préservés, les objets classés d'un point de vue immunophénotypique comme cellules épithéliales peuvent être réutilisées pour d'autres analyses. Un champ clair ainsi que des images fluorescentes des objets sélectionnés sont saisis pour confirmer que les objets identifiés sont véritablement des cellules tumorales.
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Immunivest Corporation
Trainer Michael
LandOfFree
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