Difference detection methods using matched multiple dyes

Details Difference detection methods using matched multiple dyes Difference detection methods using matched multiple dyes

G - Physics

01

N

G01N 33/68 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)

Patent

CA 2381506

A process and a kit are provided for detecting differences in two or more samples of protein, including proteins bearing post-translational modifications and peptides. Proteins are prepared, for example, from each of a different group of cell samples or body fluid samples to be compared. Each protein extract is labelled with a different one of a luminescent dye from a matched set of dyes. The matched dyes have generally the same ionic and pH characteristics but emit light at different wavelengths to exhibit a different color upon luminescence detection. The labelled protein extracts are mixed together and separated together by electrophoresis or a chromatographic method. The separation is observed to detect proteins unique to one sample or present in a greater ratio in one sample than in the other. Those unique or excess proteins will fluoresce the color of one of the dyes used. Proteins common to each sample migrate together and fluoresce the same.

L'invention concerne un procédé et un matériel de détection de différences dans au moins deux échantillons de protéines comprenant des protéines portant des modifications post-traduction et des peptides. Les protéines sont préparées, par exemple, à partir de chacun d'un groupe différent d'échantillons de cellules et d'échantillons de liquide biologique à comparer. Chaque extrait de protéine est étiqueté avec un colorant luminescent différent provenant d'un ensemble de colorants appariés. Les colorants appariés ont, d'une manière générale, les mêmes caractéristiques ioniques et de pH mais ils émettent une lumière à différentes longueurs d'ondes pour présenter une couleur différente lors d'une détection par luminescence. Les extraits de protéine étiquetés sont mélangés et séparés ensemble par électrophorèse ou un procédé chromatographique. La séparation est observée pour détecter des protéines uniques à un échantillon ou présente dans un rapport supérieur dans un échantillon par rapport à l'autre. Ces protéines uniques ou en excédent rendent fluorescente la couleur d'un des colorants utilisés. Les protéines communes à chaque échantillon migrent ensemble et le rendent fluorescent.

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