C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2320102
Disclosed is a method of detecting RNA molecules of interest in which reverse transcription primers unique to the RNA molecule of interest are used for reverse transcribing the RNA with a reverse transcriptase lacking RNAse H function and the resulting RNA/DNA hybrid is detected with an antibody specific for RNA/DNA hybrids. This method can be used to detect the presence of one or many specific RNA molecules which may be present in a sample, including RNA from different organisms (such as viruses, bacteria, fungi, plants, and animals), or RNA indicative of an infection, a disease state, or predisposition to a disease in an animal. The specificity of detection is increased relative to current detection methods involving probe hybridization since the reverse transcription primers are shorter and less subject to non- specific hybridization. Specificity of the disclosed method can also be increased by using a thermostable reverse transcriptase and performing reverse transcription at a high temperature. The disclosed method can also be used to detect reverse transcriptase activity in a sample and to identify inhibitors of reverse transcriptase. Also disclosed is a method for sequencing target RNA molecules using reverse transcriptase lacking an RNAse H function.
L'invention concerne une technique qui permet de détecter des molécules d'ARN d'intérêt. Selon la technique, on utilise des amorces de transcription inverse spécifiques de la molécule d'ARN d'intérêt pour effectuer la transcription inverse de l'ARN au moyen d'une ribonucléase dépourvue de fonction ribonucléase H, puis on détecte l'hybride d'ARN/ADN au moyen d'un anticorps spécifique des hybrides d'ARN/ADN. On peut utiliser cette technique pour détecter la présence d'une ou plusieurs molécules d'ARN dans un échantillon, en particulier d'ARN provenant de différents organismes (virus, bactéries, champignons, végétaux ou animaux), ou bien d'ARN indiquant la présence d'une infection, d'un état pathologique ou d'une prédisposition à une maladie chez un animal. La spécificité de la détection est supérieure à celle des techniques de détection actuelles faisant appel à l'hybridation de sondes, du fait que les amorces de transcription inverse sont plus courtes et moins susceptibles de s'hybrider d'une manière non spécifique. En outre, on peut augmenter la spécificité de la technique en utilisant une transcriptase inverse thermostable et en effectuant la transcription inverse à haute température. On peut également utiliser cette technique pour détecter une activité transcriptase inverse dans un échantillon et pour identifier des inhibiteurs de la transcriptase inverse. L'invention concerne aussi une technique qui permet de séquencer des molécules d'ARN cibles au moyen d'une transcriptase inverse dépourvue de fonction ribonucléase H.
Collier Clayton D.
de La Rosa Abel
Digene Corporation
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1900103