C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/863 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/39 (2006.01) C12N 15/49 (2006.01) C12N 15/54 (2006.01) C12N 15/57 (2006.01)
Patent
CA 2558864
A method is disclosed for producing a modified eukaryotic cytoplasmic DNA virus by direct molecular cloning of a modified DNA molecule comprising a modified cytoplasmic DNA virus genome. The inventive method comprises the steps of (I) modifying under extracellular conditions a DNA molecule comprising a first cytoplasmic DNA virus genome to produce a modified DNA molecule comprising the modified cytoplasmic DNA virus genome; (II) introducing the modified DNA molecule into a first host cell which packages the modified DNA molecule into infectious virions; and (III) recovering from the host cell virions comprised of the modified viral genome. The host cell is infected with a helper virus which is expressed to package the modified viral genome into infectious virions. Examples of packaging a modified poxvirus genome by a helper poxvirus of the same or different genus are described. Also disclosed are novel poxvirus vectors for direct molecular cloning of open reading frames into a restriction enzyme cleavage site that is unique in the vector. In one model poxvirus vector, the open reading frame is transcribed by a promoter located in the vector DNA upstream of a multiple cloning site comprised of several unique cleavage sites.
Description d=un procédé permettant la production d=un virus ADN cytoplasmique eucaryotique modifié par un clonage moléculaire direct d'une molécule d'ADN modifié comprenant un génome du virus ADN cytoplasmique eucaryotique modifié. Ce procédé innovateur comprend les étapes (1) de modification d'une molécule d'ADN sous des conditions extracellulaires comprenant un premier génome du virus ADN cytoplasmique pour produire une molécule d'ADN modifiée comprenant le génome du virus ADN cytoplasmique modifié; (II) introduisant la molécule d'ADN modifiée dans une première cellule hôte qui encapsule la molécule d'ADN modifiée dans des virions infectieux, et (111) la récupération des virions de la cellule hôte, constitués du génome viral modifié. La cellule hôte est infectée par un virus auxiliaire qui est exprimé pour encapsuler le génome viral modifié dans les virions infectieux. Des exemples sont présentés qui décrivent l=encapsidation d'un génome du poxvirus modifié par un poxvirus auxiliaire du même gène ou d=un gène différent. De nouveaux vecteurs poxvirus sont également décrits pour le clonage moléculaire direct de cadres de lecture ouverts dans un site de clivage par un enzyme de restriction, qui est unique dans le vecteur. Dans un vecteur poxvirus modèle, le cadre de lecture ouvert est transcrit par un promoteur situé dans l'ADN du vecteur en amont d'un site de clonage multiple, composé de plusieurs sites uniques de clivage.
Dorner Friedrich
Falkner Falko Gunter
Pfleiderer Michael
Scheiflinger Friedrich
Baxter Healthcare S.a.
Fetherstonhaugh & Co.
Immuno Aktiengesellschaft
LandOfFree
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