C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/85 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 50/06 (2006.01)
Patent
CA 2324440
A method for making a directed antisense library against a target transcript is described. A cDNA of the target transcript is cloned in an appropriate cloning vector. Next, a plurality of deletion derivatives of the cloned cDNA is prepared such that the deletions serially extend into the cDNA from one end thereof. The resulting deletion library is then treated such that cDNA is removed from the other end of each cDNA insert, thus obtaining a fragment library having fragments of a selected size. An antisense gene is then inserted into each fragment of the fragment library, resulting in the directed antisense library. An illustrative antisense gene in the hammerhead ribozyme catalytic core. Plasmids for making the antisense library, plasmids and methods for making the fragment library, and a method for identifying target sites for antisense-mediated gene inhibition are also described.
L'invention concerne un procédé de production d'une bibliothèque antisens dirigée contre un produit de transcription cible. Un ADNc du produit de transcription cible est cloné dans un vecteur approprié. Plusieurs dérivés de délétion de l'ADNc cloné sont ensuite préparés de manière à s'étendre en série à l'intérieur de l'ADNc à partir d'une extrémité de ce dernier. La bibliothèque de délétions résultante est ensuite traitée de manière à supprimer l'ADNc de l'autre extrémité de chaque insérat d'ADNc, ce qui donne une bibliothèque de fragments contenant des fragments de taille choisie. Un gène antisens est ensuite inséré dans chaque fragment contenu dans la bibliothèque de fragments pour constituer la bibliothèque antisens dirigée. Un gène antisens typique est représenté par le noyau catalytique du ribozyme à tête de marteau. On décrit aussi des plasmides destinés à constituer la bibliothèque antisens, des plasmides et des procédés de préparation de ladite bibliothèque de fragments, et un procédé pour identifier des sites cibles d'inhibition de gènes induite par des agents antisens.
Chen Zhidong
Pierce Michael L.
Ruffner Duane E.
Smart & Biggar
University Of Utah Research Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1686470