Directed evolution biosensors

G - Physics – 01 – N

Patent

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Details

G01N 33/566 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01) G01N 33/74 (2006.01)

Patent

CA 2327400

The invention exploits the evolutionary principles responsible for the development of the broad spectrum general odorant detector system, to crate a G-protein coupled receptor (GPCR) based system capable of detecting and discriminating between thousands of chemicals. The means is to subject a defined set of receptors such as G-protein coupled receptors, tyrosine kinase receptors, and/or ion channels, to the types of evolutionary forces that have created the array of approximately 1,000 natural receptors used in general olfaction by higher animals. This goal is accompolished by "directed evolution- in-a-test-tube" by imposing very high rates of mutation and extremely strict selection criteria to create a sensor. The novel sensor is selected using a sensitive melanophore-based functional bioassay. Stimulation of the sensor upon interaction with chemical signatures derived from ordinances will result in a calcium ion flux rapidly detectable as a fluorescent signal.

La présente invention exploite les principes de l'évolution, responsables du développement du système de détection d'odeur général à large spectre, pour créer un système basé sur un récepteur couplé de protéine G (GPCR) apte à détecter et à discriminer des milliers de substances chimiques. Les moyens utilisés consistent à soumettre un ensemble défini de récepteurs, tels que des récepteurs couplés de protéine G, des récepteurs tyrosine kinase, et/ou des canaux ioniques, aux forces évolutives du type de celles qui ont créé la matrice d'environ 1000 récepteurs naturels utilisés par le système olfactif des animaux supérieurs. Cet objectif de création d'un capteur est accompli par "évolution dirigée dans un tube test" en imposant des taux de mutations élevés et des critères de sélection extrêmement stricts. Le nouveau capteur est choisi à l'aide d'un biotest fonctionnel basé sur un mélanophore sensible. La stimulation du capteur lors d'interaction avec des signatures chimiques, provenant d'ordonnances, libère un flux d'ion calcium rapidement détecté par un signal fluorescent.

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