Dna modular cloning vector plasmids and methods for their use

Details Dna modular cloning vector plasmids and methods for their use Dna modular cloning vector plasmids and methods for their use

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01)

Patent

CA 2623496

Shortened abstract A group of modular cloning vector plasmids for the synthesis of transgenes or other complicated DNA constructs The invention is useful for assembling a variety of DNA fragments into a de .pi.ovo DNA construct by using cloning vectors optimized to reduce the amount of manipulation needed The module vector contains at least one multiple cloning site and multiple sets of rare restriction and/or unique homing endonuclease ("H") sites, arranged in a linear pattern This arrangement defines a modular architecture that allows the user to place domain modules or inserts into a PE3 transgene vector construct without disturbing the integrity of DNA elements already incorporated into the PE3 vector in previous cloning steps The PE3 transgenes produced using the invention may be used in a va.pi.ety of organisms including bacteria, yeast, mice, and other eukaryotes with little or no further modification

L'invention concerne un groupe de plasmides de vecteurs de clonage modulaire pour la synthèse d'un transgène ou d'une construction ADN compliquée au moyen d'un squelette possédant des points d'amarrage à des fins d'expression génique ou d'analyse d'expression génique. La méthode de cette invention est utilisée dans l'assemblage de divers fragments d'ADN dans un transgène ou une construction ADN de novo, à l'aide de vecteurs de clonage optimisés pour diminuer la quantité de manipulation fréquemment nécessaire. Le vecteur primaire renferme au moins un site de clonage multiple et plusieurs ensembles de sites d'endonucléase "homing" uniques et/ou de restriction rare disposés dans un motif linéaire. Cette disposition forme une architecture modulaire qui permet à l'utilisateur de placer des inserts dans une construction de transgène sans perturber l'intégrité des éléments d'ADN déjà incorporés dans le vecteur primaire au cours d'étapes de clonage antérieures. Les transgènes produits au moyen de la méthode de ladite invention peuvent être utilisés dans un seul organisme ou dans divers organismes, y compris, des bactéries, de la levure, des souris et d'autres eucaryotes avec peu ou pas de modification.

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