C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/54 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2283789
The present invention relates to mutant DNA polymerases that exhibit reduced discrimination against labeled nucleotides into polynucleotides. The DNA polymerases of the invention have at least one mutation in the nucleotide label interaction region of the enzyme such the mutation results in reduced discrimination against labeled nucleotides. The nucleotide label interaction regions is located at portions of the O-helix, (ii) the K-helix, and (iii) the inter O-P helical loop of Taq DNA polymerase or analogous positions in other DNA polymerases. In addition to providing novel mutant DNA polymerases, the invention also provides polynucleotides encoding the subject mutant DNA polymerases. The polynucleotides provided may comprise expression vectors for the recombinant production of the mutant polymerases. The invention also provides host cells containing the subject polynucleotides. The invention also includes numerous methods of using the subject DNA polymerases, including uses for chain termination sequencing and PCR. Another aspect of the invention is to provide kits for synthesizing fluorescently labeled polynucleotides in accordance with the methods of the invention. Kits of the invention comprise a mutant DNA polymerase of the invention and a fluorescently labeled nucleotide that exhibits reduced discrimination with respect to the mutant DNA polymerase in the kit.
La présente invention a trait à des ADN polymérases mutantes qui présentent une capacité de discrimination réduite à l'égard de nucléotides marqués se trouvant à l'intérieur de polynucléotides. Les ADN polymérases de l'invention comportent au moins une mutation dans la zone d'interaction de marqueur de nucléotide de l'enzyme, de sorte que la mutation a pour conséquence une capacité de discrimination réduite à l'égard de nucléotides marqués. La zone d'interaction de marqueur de nucléotide se situe à des parties de l'hélice O, (2) de l'hélice K, ou (3) de l'intervalle entre la boucle hélicoïdale O-P de Taq d'ADN polymérase, ou à des positions analogues dans d'autres ADN polymérases. Outre les nouvelles ADN polymérases mutantes, l'invention concerne également des polynucléotides codant pour les ADN polymérases mutantes en question. Ces polynucléotides peuvent comporter des vecteurs d'expression servant à la production par recombinaison des polymérases mutantes. L'invention se réfère également à des cellules hôtes contenant les polynucléotides en question. L'invention concerne également de nombreux procédés d'utilisation des ADN polymérases en question, comprenant des utilisations en vue d'un séquençage de terminaison de chaîne, et de PCR. Un autre aspect de l'invention a trait à des trousses utiles pour synthétiser des polynucléotides marqués par fluorescence selon les procédés de l'invention. Les trousses de l'invention comportent une ADN polymérase mutante de l'invention, et un nucléotide marqué par fluorescence qui présente une capacité de discrimination réduite à l'égard de l'ADN polymérase mutante fournie dans la trousse.
Bloom Curtis
Brandis John
Richards Jack
Applera Corporation
California Institute Of Technology
Perkin-Elmer Corporation The
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1664526