C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/31 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 14/31 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 9/90 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12Q 1/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2318574
The duplex DNA of chromosomes is replicated in a multicomponent process. A helicase unwinds the DNA, a replicase synthesizes new DNA, and primase repeatedly synthesizes new primed starts on the lagging strand. The present invention is directed to the genes from Gram positive bacterium encoding these proteins, and their characterization. Replicases are highly efficient polymerases. There are several mechanisms by which a replicase can achieve high processivity. The invention determines that the replicase of Staphylococcus operates as a 3 component system in which a clamp loader enzyme assembles a sliding clamp protein onto DNA. The sliding clamp then binds the DNA polymerase III holoenzyme making it highly efficient. The invention identifies two DNA polymerase III enzymes in Gram positive bacterium, each of which operate with the clamp and clamp loader, to extend a single primed site around a long (over 5kb) ssDNA template. These replication proteins can be utilized in a variety of assays to screen chemical compound libraries for an antibiotic compound.
L'ADN duplex de chromosomes est répliqué dans un processus à plusieurs composants. Une hélicase déroule l'ADN, une réplicase synthétise le nouvel ADN, et une primase synthétise de façon répétée les nouveaux points de départ sur le brin secondaire. Cette invention se rapporte aux gènes provenant de la bactérie Gram-positif codant ces protéines, ainsi qu'à leur caractérisation. Les réplicases sont des polymérases hautement efficaces. Il existe plusieurs mécanismes par lesquels une réplicase peut atteindre une transformabilité élevée. Cette invention détermine que la réplicase d'un staphylocoque fonctionne comme un système à trois composants dans lequel une enzyme chargeur de pince assemble une protéine de pince coulissante sur l'ADN. La pince coulissante se lie ensuite à l'holoenzyme ADN-polymérase III, la rendant hautement efficace. Cette invention identifie deux enzymes ADN-polymérase III dans la bactérie Gram-positif, qui agissent chacune avec la pince et avec le chargeur de pince, afin de déployer un seul site amorcé autour d'une matrice d'ADNss longue (plus de 5 kb). Ces protéines de réplication peuvent être utilisées dans une grande variété de dosages pour le criblage de bibliothèques de composés chimiques, afin d'en identifier les composés antibiotiques.
O'donnell Michael E.
Whipple Richard
Zhang Dan
Gowling Lafleur Henderson Llp
The Rockefeller University
LandOfFree
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