G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/53 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/16 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)
Patent
CA 2513025
The present invention provides a dual expression vector, and methods for its use, for the expression and secretion of a full-length polypeptide of interest in eukaryotic cells, and a soluble domain or fragment of the polypeptide in bacteria. When expressed in bacteria, transcription from a bacterial promoter within a first intron and termination at the stop codon in a second intron results in expression of a fragment of the polypeptide, e.g., a Fab fragment, whereas in mammalian cells, splicing removes the bacterial regulatory sequences located in the two introns and generates the mammalian signal sequence, allowing expression of the full-length polypeptide, e.g., IgG heavy or light chain polypeptide. The dual expression vector system of the invention can be used to select and screen for new monoclonal antibodies, as well as to optimize monoclonal antibodies for binding to antigenic molecules of interest.
L'invention concerne un vecteur à double expression, ainsi que des méthodes servant à mettre ce vecteur en application, de manière à exprimer et à sécréter un polypeptide à chaîne totale dans des cellules eucaryotes, et un domaine soluble ou fragment de ce polypeptide dans des bactéries. Quand elle est exprimée dans des bactéries, la transcription depuis un promoteur bactérien à l'intérieur d'un premier intron et la terminaison au niveau du codon d'arrêt dans un deuxième intron débouche sur l'expression d'un fragment du polypeptide, par exemple, un fragment Fab, tandis que dans des cellules mammifères, l'épissure supprime les séquences bactériennes régulatoires situées entre les deux introns et génère la séquence de signalisation mammifère, ce qui déclenche l'expression du polypeptide à chaîne totale, par exemple, un polypeptide à chaîne lourde ou légère IgG. On peut utiliser ce système vectoriel à double expression afin de sélectionner et de rechercher par criblage de nouveaux anticorps monoclonaux et d'optimiser ces anticorps monoclonaux en vue d'une fixation sur des molécules antigènes.
Huang Ling
Johnson Leslie Sydnor
Macrogenics Inc.
Osler Hoskin & Harcourt Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1725855