Efficient insertion of dna into embryonic stem cells

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 5/00 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2718517

The present mvention relates, m general, to a method for introducmg a heterologous replacement gene sequence into a host embryonic stem cell to replace an endogenous host gene target sequence In particular, the mvention relates to a method for mserting large pieces of DNA mto embryonic stem cells with improved efficiency, by first deletmg the endogenous host gene target sequence, and subsequently utilismg two proximally positioned site-specific recombinase target (RT) sites to insert a heterologous replacement gene sequence mto the host chromosome

La présente invention concerne, en général, un procédé pour introduire une séquence de gène de remplacement hétérologue dans une cellule souche embryonnaire hôte pour remplacer une séquence cible de gène dhôte endogène. En particulier, linvention concerne un procédé pour insérer de grands segments dADN dans des cellules souches embryonnaires avec une efficacité améliorée, dans un premier temps en délétant la séquence cible de gène dhôte endogène, et ensuite en utilisant deux sites cibles de recombinase (RT) à site spécifique positionnés à proximité lun de lautre pour insérer une séquence de gène de remplacement hétérologue dans le chromosome hôte.

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