Efficient purification of adenovirus

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 7/02 (2006.01) B01D 15/36 (2006.01) B01J 41/20 (2006.01) C12Q 1/06 (2006.01) G01N 30/96 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) G01N 30/06 (2006.01) G01N 30/62 (2006.01) G01N 30/88 (2006.01)

Patent

CA 2328462

A method of enriching a solution of an adenovirus comprising applying a mixed solution comprising an adenovirus and at least one undesired type of biomolecule to an anion exchange chromatography resin containing a binding moiety selected from the group consisting of dimethylaminopropyl, dimethylaminobutyl, dimethylaminoisobutyl, and dimethylaminopentyl and eluting the adenovirus from the chromatography resin. Also provided is a method of purifying an adenovirus from adenovirus-infected cells comprising lysing such cells, applying the lysate to a single chromatography resin, eluting the adenovirus from the chromatography resin, and collecting a fraction containing adenovirus that is substantially as pure as triple CsC1 density gradient purified adenovirus. The present method further provides a method of accurately quantifying the number of adenoviral particles in a solution of adenovirus comprising applying to and eluting from an anion exchange chromatography resin a sample solution of adenovirus, comparing the absorbance of the sample solution of adenovirus and the absorbance of a standard solution of adenovirus, and quantifying the number of adenoviral particles in the sample solution.

L'invention se rapporte à un procédé d'enrichissement d'une solution d'adénovirus qui consiste à appliquer une solution mixte comportant un adénovirus et au moins un type indésirable de biomolécule sur une résine pour chromatographie échangeuse d'anions contenant une fraction de liaison sélectionnée dans le groupe constitué par le diméthylaminopropyle, le diméthylaminobutyle, le diméthylaminoisobutyle et le diméthylaminopentyle et à éluer l'adénovirus à partir de la résine pour chromatographie. L'invention se rapporte également à un procédé de purification d'un adénovirus à partir de cellules infectées par un adénovirus, qui consiste à effectuer la lyse de telles cellules, à appliquer le lysat obtenu à une résine pour chromatographie unique, à éluer l'adénovirus à partir de la résine pour chromatographie et à recueillir une fraction contenant l'adénovirus qui est sensiblement pur sous forme d'adénovirus purifié à gradient de densité CsCl triple. Le procédé de la présente invention qui permet de quantifier précisément les particules adénovirales dans une solution d'adénovirus consiste à appliquer une solution échantillon d'adénovirus à une résine pour chromatographie échangeuse d'anions et à éluer l'adénovirus à partir de cette résine, à comparer l'absorbance d'une solution normalisée d'adénovirus et à déterminer le nombre de particules adénovirales dans la solution échantillon.

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