Electrophoretic separation of analytes by molecular mass

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 27/447 (2006.01)

Patent

CA 2614349

The present invention relates to a method and apparatus for the separation of analytes based on their molecular weight, by application of an electric field across a low-friction matrix (e.g., a polymeric gel, polymeric beads, highly viscous liquids or porous glass) modified with a charged separation agent. The matrix comprises charged regions ordered in a monotonous sequence distributed throughout the matrix so as to generate a charge density gradient. When an external electric field is applied to a sample of a charged analyte complex deposited at one end of the matrix, the complex will move through the different charged regions and focusing (immobilization by charge neutralization) of different analytes in different charge regions will occur. Since the analyte complex preserves the charge to mass ratio, the total charge of the complex is directly proportional to its weight. Therefore, analytes of different sizes will possess different charges and will migrate differently across the porous matrix. They systems are suitable for planar, capillary in- tube electrophoresis, as well as multi-channel arrays of capillaries filled with charge gradient gels, serial arrays of discrete compartments with charge density gradient, arrays in a chip format, pre-designed mass focusing arrays for specific protein masses in application for protein and DNA marker diagnostics, and multi compartment trapping devices for specific mass ranges.

La présente invention concerne un procédé et un appareil permettant de séparer des analytes sur la base de leur poids moléculaire par application d'un champ électrique sur une matrice à faible frottement (telle qu'un gel polymère, des billes polymères, des liquides hautement visqueux ou du verre poreux) modifiée par un agent de séparation chargé. La matrice comprend des régions chargées ordonnées en une séquence monotone répartie dans la matrice de façon qu'un gradient de densité de charge soit généré. Lorsqu'un champ électrique externe est appliqué sur un échantillon d'un complexe d'analytes chargés déposé à une extrémité de la matrice, le complexe se déplace à travers les différentes régions chargées et on observe une focalisation (immobilisation par neutralisation de charge) de différents analytes dans différentes régions de charge. Du fait que le complexe d'analytes conserve le rapport charge-masse, la charge totale du complexe est directement proportionnelle à son poids. Ainsi, les analytes de différentes tailles présentent différentes charges et migrent différemment dans la matrice poreuse. Les systèmes peuvent être utilisés pour une électrophorèse en tube capillaire planaire ainsi que pour des réseaux multicanaux de capillaires remplis de gels à gradient de charge, des réseaux en série de compartiments discrets à gradient de densité de charge, des réseaux dans un format de puce, des réseaux de focalisation de masses préalablement conçus pour masses de protéines spécifiques pour des diagnostics de protéines et de marqueurs d'ADN, et des dispositifs de piégeage à compartiments multiples pour des gammes de masses spécifiques.

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