C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/09 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01)
Patent
CA 2394614
Method of nuclear transfer involving the transplantation of differentiated donor cell nuclei into enucleated oocytes of a species different from the donor cell, in conjunction with compatible cytoplasm and/or mitochondria (of same species as donor), are provided. The resultant nuclear transfer units are useful for the production of isogenic embryonic stem cells, in particular human isogenic embryonic or stem cells. These embryonic or stem-like cells are useful for producing desired differentiated cells and for introduction, removal or modification, of desired genes, e.g., at specific sites of the genome of such cells by homologous recombination. These cells, which may contain a heterologous gene, are especially useful in cell transplantation therapies and for in vitro study of cell differentiation. Nuclear transfer efficiency is enhanced by introduction of compatible cytoplasm or mitochondrial DNA (same species or similar to donor cell or nucleus). Also, nuclear transfer efficiency can further optionally be enhanced by genetically altering donor cells to inhibit apoptosis, by selecting for a specific cell cycle and/or by culturing under conditions that enhance embryonic growth and development.
L'invention concerne une méthode de transfert nucléaire qui consiste à transplanter des noyaux de cellules donneuses différentiées dans des ovocytes énucléés d'une espèce différente de celle de la cellule donneuse, conjointement avec de l'ADN cytoplasmique et/ou mitochondrien compatible (de la même espèce que le donneur). Les unités de transfert nucléaire résultantes sont utiles pour la production de cellules souches embryonnaires isogènes, notamment de cellules souches ou embryonnaires isogènes humaines. Ces cellules embryonnaires ou souches sont utiles pour la production de cellules différentiées voulues et pour l'introduction, le retrait ou la modification de gènes voulus, par exemple dans des sites spécifiques du génome desdites cellules par recombinaison homologue. Lesdites cellules, qui peuvent contenir un gène hétérologue, sont particulièrement utiles dans les thérapies de transplantation cellulaire et pour l'étude in vitro de la différentiation cellulaire. L'efficacité du transfert nucléaire est accrue par l'introduction d'ADN cytoplasmique ou mitochondrien compatible (de même espèce ou similaire à la cellule donneuse ou au noyau donneur). Par ailleurs, l'efficacité du transfert nucléaire peut être encore éventuellement améliorée par la modification génétique des cellules donneuses pour l'inhibition de l'apoptose, par la sélection pour un cycle cellulaire spécifique et/ou par la mise en culture dans des conditions augmentant la croissance et le développement embryonnaire.
Cibelli Jose
Lanza Robert
Robl James
As Represented By Its Amherst Campus University Of Massachusetts A. Public Institution Of Higher Educ
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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