Enabling the use of long dsrna for gene targeting in...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/113 (2010.01) A61K 31/713 (2006.01) A61K 35/74 (2006.01) A61P 31/12 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01) C40B 40/02 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)

Patent

CA 2728575

The present invention provides a method of enabling the use of long dsRNA for gene silencing in mammalian cells through bacteria, preferably non-pathogenic or therapeutic strains of bacteria. DNA that encodes long double-strand RNAs are transformed into bacteria and processed in the bacterial cells into a mixture of smaller RNA duplexes and then released into the cytoplasm of the target cells, resulting in modulation of gene expression in the target cells. The methods overcome the incompatibility between long strong dsRNA and mammalian cells by eliminating, or mitigating, the non-specific innate immune response. The eukaryotic cells can be mammalian cells or avian cells. The gene of interest can be a mammalian, avian, bacterial, eukaryotic, or viral gene.

La présente invention concerne un procédé permettant l'utilisation d'ARNds longs pour le silençage de gènes dans des cellules de mammifères par l'intermédiaire de bactéries, de préférence des souches de bactéries non pathogènes ou thérapeutiques. De l'ADN qui code des ARN bicaténaires longs est utilisé pour transformer des bactéries et les ARN sont transformés dans les cellules bactériennes en un mélange de duplexes d'ARN plus petits, puis libérés dans le cytoplasme des cellules cibles, ce qui provoque la modulation de l'expression des gènes dans les cellules cibles. Les procédés résolvent le problème de l'incompatibilité entre les ARNds longs forts et les cellules de mammifères en éliminant, ou en atténuant, la réponse immunitaire innée non spécifique. Les cellules eucaryotiques peuvent être des cellules de mammifères ou des cellules aviaires. Le gène d'intérêt peut être un gène de mammifère, aviaire, bactérien, eucaryotique ou viral.

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