C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12Q 1/25 (2006.01)
Patent
CA 2735979
Provided are methods for enhanced sequencing of nucleic acid templates. Also provided are reaction conditions that increase branching fractions during polymerization reactions. Also provided are compositions comprising modified recombinant polymerases that exhibit branching fractions that are higher than the branching fractions of the polymerases from which they were derived. Provided are compositions comprising modified recombinant polymerases that exhibit delayed translocation relative to the polymerases from which they were derived. Also provided are compositions comprising modified recombinant polymerases that exhibit increased nucleotide or nucleotide analog residence time at an active site of the polymerase. Provided are methods for generating polymerases with the aforementioned phenotypes and methods of using such polymerases to sequence a DNA template or make a DNA. Also provided are methods and nucleic acid sequencing systems for determining which labeled nucleotide is in- corporated at a site during a template-dependent polymerization reaction.
La présente invention concerne des méthodes permettant un meilleur séquençage de matrices d'acide nucléique. L'invention concerne également des conditions réactionnelles qui augmentent les fractions de ramification pendant les réactions de polymérisation. L'invention porte également sur des compositions contenant des polymérases recombinantes modifiées qui présentent des fractions de ramification qui sont plus importantes que les fractions de ramification des polymérases desquelles elles sont dérivées. L'invention concerne aussi des compositions contenant des polymérases recombinantes modifiées qui présentent une translocation retardée par rapport aux polymérases desquelles elles sont dérivées. Selon l'invention, les compositions peuvent également contenir des polymérases recombinantes modifiées qui présentent un temps de séjour de nucléotides ou d'analogues nucléotidiques augmenté au niveau d'un site actif de la polymérase. L'invention porte également sur des méthodes permettant de produire des polymérases avec les phénotypes susmentionnés et des méthodes d'utilisation de ces polymérases pour séquencer une matrice d'ADN ou fabriquer un ADN. L'invention porte également sur des méthodes et des systèmes de séquençage d'acide nucléique permettant de déterminer quel nucléotide marqué a été incorporé en un site particulier pendant une réaction de polymérisation dépendant de la matrice.
Bibillo Arkadiusz
Bjornson Keith
Hanes Jeremiah
Korlach Jonas
Patel Pranav
Fetherstonhaugh & Co.
Pacific Biosciences Of California Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1383365