C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/10 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01)
Patent
CA 2708609
The ADP-ribosyltransferase, Vip2, exerts its intracellular toxicity in insects by modifying actin and preventing actin polymerization. Due to the nature of this toxin, expression of Vip2 in planta is lethal to the plant. Described herein are methods of making zymogens of toxic proteins that are benign in a non-target organism and are activated in a target organism. Disclosed herein are methods of engineering a random propeptide library at a terminus of a toxic protein and selecting for malfunctional variants in yeast. Using this method a selected proenzyme possesses reduced enzymatic activity as compared to the wild-type Vip2 protein, but remains a potent toxin towards corn rootworm larvae. The Vip2 zymogen can be proteolytically activated by corn rootworm digestive proteases.
L'ADP-ribosyltransférase, Vip2, exerce une toxicité intracellulaire chez des insectes par la modification de l'actine et la prévention de polymérisation de l'actine. En raison la nature de cette toxine, l'expression de l protéine Vip2 dans une plante est mortelle pour la plante. La présente invention concerne des procédés de fabrication de zymogènes de protéines toxiques qui sont bénignes dans un organisme non ciblé et sont activées dans un organisme cible. La présente invention concerne également des procédés de modification génétique d'une banque de polypeptides aléatoires au niveau d'une extrémité terminale d'une protéine toxique et la sélection de variants anormaux dans la levure. Grâce à ce procédé, un pro-enzyme sélectionné possède une activité enzymatique réduite comparée à la protéine Vip2 de type sauvage, mais reste une toxine puissante vis-à-vis de larves nuisibles aux racines du maïs. Le zymogène de la protéine Vip2 peut être soumis à une activation protéolytique par des protéases digestives de larves nuisibles aux racines du maïs.
Chen Jeng S.
Jucovic Milan
Palekar Narenda V.
Walters Frederick S.
Fetherstonhaugh & Co.
Syngenta Participations Ag
LandOfFree
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