C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)
Patent
CA 2390152
Disclosed are a variety of methods for achieving enhanced expression from a target nucleotide sequence in a plant e.g. comprising the step of transiently introducing into a tissue of a plant (e.g. a leaf) a first nucleic acid comprising the target nucleotide sequence and a second nucleic acid encoding a Post Transcriptional Gene Silencing (PTGS) suppressor protein (preferably of viral or plant origin), wherein the first and second nucleic acids are comprised within a single binary vector, construct, or the first and second nucleic acid sequences are comprised within a first binary vector and a second binary vector construct respectively. The plant tissue may then be harvested for the protein. Such methods can give much higher levels of gene expression than are obtainable using stable transgenes, or certain replicating vectors. Also disclosed are specific PTGS suppressor proteins: potato virus X (pvx), p25 protein; african cassava mosaic virus (acmv) AC2 protein; rice yellow mottle virus (rymv) P1 protein; tomato bushy stunt virus (tbsv) 19K protein; plus variants of these. These suppressors may be used in any PTRS context, including the enhancement of transient expression systems.
L'invention concerne plusieurs procédés permettant d'obtenir une expression accrue d'une séquence nucléotidique cible dans une plante, consistant par exemple à introduire de façon transitoire dans un tissu d'une plante (p. ex. une feuille), un premier acide nucléique comprenant la séquence nucléotidique cible et un second acide nucléique codant pour une protéine suppressive d'inactivation génique post-transcriptionnelle (PTGS) (de préférence d'origine virale ou végétale). Le premier et le second acide nucléique sont compris dans un vecteur binaire unique de synthèse, ou la première et la seconde séquence d'acide nucléique sont respectivement comprises dans un premier vecteur binaire ou un second vecteur binaire de synthèse. Le tissu végétal peut alors être reccueilli pour la protéine. Ces procédés peuvent produire des niveaux d'expression génique beaucoup plus élevés que ceux pouvant être obtenus au moyen de transgènes stables, ou de certains vecteurs de réplication. L'invention concerne également des protéines suppressives de PTGS spécifiques : la protéine p25 du virus X de la pomme de terre (pvx), la protéine AC2 du virus africain de la mosaïque du manioc (acmv), la protéine P1 du virus de la panachure jaune du riz (rymv), la protéine 19K du virus du rabougrissement de la tomate (tbsv), ainsi que des variants de ces dernières. Ces suppresseurs peuvent être utilisés dans un contexte de PTGS quelconque, dont l'amélioration de systèmes d'expression transitoire.
Baulcombe David Charles
Hamilton Andrew John
Voinnet Olivier
Fetherstonhaugh & Co.
Plant Bioscience Limited
LandOfFree
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