Enhancement of microbial ethanol production

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P

Patent

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Details

C12P 7/06 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/53 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2681380

A thermophilic microorganism lacks lactate dehydrogenase activity and preferably contains an active pyruvate formate lyase pathway. The thermophilic microorganism contains a gene encoding an NAD-linked formate dehydrogenase. The gene encoding an NAD-linked formate dehydrogenase is preferably a codon optimised version of the gene encoding a thermostable NAD-linked formate dehydrogenase. DNA constructs allow stable expression of the gene encoding an NAD-linked formate dehydrogenase in the thermophilic microorganism. The DNA constructs are based upon use of an insertion sequence to achieve stable expression or recombination to insert the gene encoding an NAD-linked formate dehydrogenase into the lactate dehydrogenase gene, thus achieving gene knockout and new functionality in a single step. The microorganisms are useful in fermentation of sugars to produce ethanol.

L'invention concerne un micro-organique thermophile ne présentant aucune activité lacticodéshydrogénase et contenant de préférence une voie active de la pyruvate formate lyase. Ce micro-organisme thermophile contient un gène codant pour une formate déshydrogénase liée à NAD. Le gène codant pour une formate déshydrogénase liée à NAD est de préférence une version à codon optimisé du gène codant pour une déshydrogénase formate liée à NAD thermostable. Des ADN hybrides permettent d'obtenir une expression stable du gène codant pour une formate déshydrogénase liée à NAD dans le micro-organisme thermophile. Les ADN hybrides reposent sur l'utilisation d'une séquence d'insertion permettant d'obtenir une expression stable ou une recombinaison pour insérer le gène codant pour la formate déshydrogénase liée à NAD dans le gène de la lacticodéshydrogénase, et ainsi une inactivation du gène et une nouvelle fonctionnalité en une seule étape. Les micro-organismes de l'invention sont utiles dans la fermentation de sucres pour la production d'éthanol.

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