C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/12 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01)
Patent
CA 2485203
Mutant forms of DNA polymerase I having mutations within motif A and/or motif B in the active domain that increase error rates during replication. Expression plasmid constructs and cell lines for expressing these low-fidelity polymerase mutants are provided. Methods are also provided for utilizing these low-fidelity DNA polymerase I mutants for generating libraries of randomly- mutagenized genes, which may be prokaryotic or eukaryotic. Random mutagenesis involves the coupling of mutagenesis and selection in continuous culture for convenient iteration, which results in diverse range of base pair substitutions, widely distributed along the sequence. Some advantages include the minimization of deleterious damage to chromosomal DNA, and adaptation to strains that are amenable to complementation, which substantially facilitates the generation and identification of enzymes with altered properties.
La présente invention concerne des formes de mutant de polymérase I présentant des mutations dans le motif A et/ou dans le motif B dans le domaine actif qui augmentent les taux d'erreur pendant la réplication. Cette invention concerne aussi des construits plasmidiques d'expression et des lignées cellulaires permettant d'exprimer ces mutants de polymérase d'ADN peu fidèles. Cette invention concerne aussi des mutants de polymérase I d'ADN peu fidèles destinés à générer des bibliothèques de gènes mutagénisés aléatoirement, lesquels peuvent être procaryotes ou eucaryotes. La mutagenèse aléatoire implique le couplage de la mutagenèse et de la sélection en culture continue pour une itération pratique, laquelle permet d'obtenir diverses plages de substitutions de paires de base généreusement réparties le long de la séquence. Parmi certains avantages, on minimise les dégradations nocives de l'ADN chromosomique et on permet une adaptation à des souches qui peuvent faire l'objet de complémentation, ce qui facilite considérablement la génération et l'identification d'enzymes aux propriétés modifiées.
Camps Manuel
Loeb Lawrence A.
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
University Of Washington
LandOfFree
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