C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01) C07K 7/06 (2006.01) C07K 7/08 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 9/16 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/42 (2006.01)
Patent
CA 2492178
A method for detecting transferase activity of a sample includes contacting the sample with a substrate and at least one of a phosphate group donor and a phosphate group acceptor. The substrate includes a reporter compound and amino acids. A peptidase is added that cleaves a non-phosphorylated substrate at a first rate and a phosphorylated substrate and a second rate. The output of the reporter compound is detected. In a preferred embodiment, the transferase activity detected is a kinase activity. In another preferred embodiment, the transferase activity detected is a phosphatase activity. Also provided is a method of screening for alterations in a transferase reaction. Kits and peptide substrate are also provided for carrying out at least one of the methods of the invention.
Procédé servant à détecter une activité de transférase dans un spécimen consistant à mettre en contact ce spécimen avec un substrat et au moins un groupe donneur de phosphate et un groupe accepteur de phosphate. Ce substrat comprend un composé rapporteur et des acides aminés. On ajoute une peptidase clivant un substrat non phophorilé à un premier stade et un substrat phosphorilé à un deuxième stade. On détecte la sortie du composé rapporteur. Dans un mode de réalisation préféré, l'activité de transférase détectée est une activité de kinase. Dans un autre mode de réalisation préféré, l'activité de transférase détectée est une activité de phosphatase. L'invention concerne également un procédé de criblage de variation d'une réaction de transférase. Elle concerne également des trousses et un substrat peptidiques servant à mette en application au moins un de ces procédés.
Bulleit Robert F.
Goueli Said A.
Promega Corporation
Ridout & Maybee Llp
LandOfFree
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