C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C07K 14/745 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 9/48 (2006.01) C12N 9/96 (2006.01) C12N 15/57 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01)
Patent
CA 2127362
A method is disclosed to make any protein in a form that can be isolated rapidly from a solution using a specific monoclonal antibody designated "HPC-4". It has now been determined that it is possible to form a fusion protein of the epitope with a protein to be isolated, and isolate the protein using HPC-4-based affinity chromatography. In the preferred embodiment, a specific protease cleavage site is inserted between the epitope and the protein so that the epitope can be easily removed from the isolated protein. In an example, a functionally active soluble tissue factor including the twelve amino acid epitope recognized in. combination with calcium by HPC-4 and a factor Xa cleavage site was expressed from a vector inserted into a procaryotic expression system. The recombinant tissue factor can be rapidly isolated in a single chromatographic step using the HPC-4 monoclonal antibody immobilized on a suitable substrate. Once isolated, the Protein C epitope is removed by cleavage with factor Xa, leaving the functionally active, soluble tissue factor.
L'invention se rapporte à un procédé permettant de produire n'importe quelle protéine sous une forme pouvant être rapidement isolée à partir d'une solution à l'aide d'un anticorps monoclonal spécifique, l'"HPC-4". Il a à présent été déterminé qu'il est possible de former une protéine fusionnée composée de l'épitope et d'une protéine devant être isolée, et d'isoler la protéine par l'intermédiaire de la chromatographie par affinité basée sur l'HPC-4. Selon un mode préféré de réalisation, un site de segmentation spécifique par protéase est inséré entre l'épitope et la protéine de façon à pouvoir enlever aisément l'épitope de la protéine isolée. Selon un exemple, un facteur tissulaire soluble à activité fonctionnelle, et comprenant l'épitope à douze amino-acides reconnu, en combinaison avec du calcium, par l'HPC-4, ainsi qu'un site de segmentation par facteur Xa, a été exprimé à partir d'un vecteur introduit dans le système d'expression procaryotique. Le facteur tissulaire recombiné peut être rapidement isolé au cours d'une étape chromatographique unique à l'aide de l'anticorps monoclonal HPC-4 immobilisé sur un substrat approprié. Une fois la protéine isolée, l'épitope de la protéine C est enlevé par segmentation par le facteur Xa, ne laissant ainsi que le facteur tissulaire soluble à activité fonctionnelle.
Esmon Charles T.
Morrissey James H.
Rezaie Alireza
Bereskin & Parr
Oklahoma Medical Research Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1672524