Expression induction method

Details Expression induction method Expression induction method

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

195/1.17, 195/1.

C12N 15/53 (2006.01) C12N 9/06 (2006.01) C12N 9/72 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)

Patent

CA 2004632

Disclosed is a method of producing increased amounts of a protein of interest in a cell by induction. The method includes transfecting a cell with multiple copies of an expression vector, each copy of which includes an espressible gene encoding an enzymatically functional dihydrofolate reductase (DHFR) and an expressible gene encoding a protein of interest. Transfected cells are cultured in the presence of methotrexate (MTX) to produce a plurality of clones. A clone containing plural copy number of the vectors which co-express DHFR and the protein of interest is then selected and cultured, The cultured clone is treated with MTX to enhance the expression of the protein of interest by inducing an increase in transcription without substantially amplifying the genes encoding the protein of interest and DHFR.

Est divulguée une méthode de production de quantités accrues d'une protéine d'intérêt dans une cellule par induction. La méthode comprend la transfection d'un cellule avec de multiples copies d'un vecteur d'expression, dont chaque copie comporte un gène expressible codant une dihydrofolate réductase (DHFR) enzymatiquement fonctionnelle et un gène expressible codant une protéine d'intérêt. Les cellules transfectées sont cultivées en présence de méthotrexate (MTX) afin de produire plusieurs clones. Un clone contenant plusieurs copies des vecteurs qui co-expriment la DHFR et la protéine d'intérêt est alors sélectionné et mis en culture. Le clone cultivé est traité au MTX afin de stimuler l'expression de la protéine d'intérêt en provoquant une augmentation de la transcription sans amplification substantielle des gènes codant la protéine d'intérêt et la DHFR.

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