C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/11 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2304642
The present invention relates generally to activating gene expression or causing over-expression of a gene by recombination methods in situ. The invention also relates generally to methods for expressing an endogenous gene in a cell at levels higher than those normally found in the cell. In one embodiment of the invention, expression of an endogenous gene is activated or increased following integration into the cell, by non-homologous or illegitimate recombination, of a regulatory sequence that activates expression of the gene. In another embodiment, the expression of the endogenous gene may be further increased by co-integration of one or more amplifiable markers, and selecting for increased copies of the one or more amplifiable markers located on the integrated vector. The invention also provides methods for the identification and expression of genes undiscoverable by current methods since no target sequence is necessary for integration. The invention also provides methods for isolation of nucleic acid molecules (particularly cDNA molecules) encoding transmembrane proteins, and for isolation of cells expressing such transmembrane proteins which may be heterologous transmembrane proteins. The invention also relates to isolated genes, gene products, nucleic acid molecules, and compositions comprising such genes, gene products and nucleic acid molecules, that may be used in a variety of therapeutic and diagnostic applications. Thus, by the present invention, endogenous genes, including those associated with human disease and development, may be activated and isolated without prior knowledge of the sequence, structure, function, or expression profile of the genes.
L'invention concerne généralement l'activation de l'expression d'un gène ou l'induction de la surexpression d'un gène par des méthodes de recombinaison in-situ. Elle porte généralement sur des méthodes d'expression d'un gène endogène dans une cellule, à des niveaux supérieurs à ceux que l'on trouve normalement dans la cellule. Dans un mode de réalisation de l'invention, l'expression d'un gène endogène est activée ou augmentée consécutivement à l'intégration dans la cellule, par recombinaison non homologue ou remaniement asymétrique, d'une séquence de régulation qui active l'expression du gène. Dans un autre mode de réalisation, l'expression du gène endogène peut être encore augmentée par co-intégration d'un ou plusieurs marqueurs amplifiables, et par la sélection de copies accentuées desdits marqueurs situés sur le vecteur intégré. L'invention se rapporte encore à des méthodes d'identification et d'expression de gènes que l'on ne peut découvrir par les méthodes connues, car aucune séquence cible n'est nécessaire pour l'intégration. Elle porte aussi sur des méthodes d'isolement de molécules d'acide nucléique (notamment des molécules d'ADNc) codant pour des protéines transmembranaires, et d'isolement des cellules exprimant lesdites protéines transmembranaires qui peuvent être des protéines transmembranaires hétérologues. Elle concerne des gènes isolés, des produits géniques, des molécules d'acide nucléique et des compositions comprenant lesdits gènes, des produits géniques et des molécules d'acide nucléique pouvant être utilisés dans un grand nombre d'applications thérapeutiques et diagnostiques. Ainsi, on peut activer et isoler par le procédé de l'invention, des gènes endogènes, dont ceux associés à la maladie humaine et au développement humain, sans qu'il soit nécessaire de connaître préalablement la séquence, la structure, la fonction ou le profil d'expression des gènes.
Athersys Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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