Expression system used for the antibiotic-free production of...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/75 (2006.01) C12N 9/04 (2006.01)

Patent

CA 2686263

The invention relates to an expression system for the production of one or several target polypeptide(s), comprising a host cell, in whose genome the DNA sequence coding the glycerine-3-phosphate dehydrogenase is inactivated or partially or fully deleted and which is transformed with an extrachromosomal element that comprises a DNA Sequence coding the target polypeptide(s) and the glycerine-3-phosphate dehydrogenase. According to the invention, both the host cell genome and the extrachromosomal element do not carry any antibiotic-resistant gene. The invention also relates to a DNA sequence coding for a polypeptide with glycerine-3-phosphate dehydrogenase activity, characterized in that the DNA sequence is selected from a) DNA sequences comprising a nucleotide sequence according to SEQ ID NO:1; b) DNA sequences comprising a nucleotide sequence represented by the nucleotides 1338 to 2375 of SEQ ID NO:1; c) DNA sequences coded by the plasmid pTP01 with the plasmid card according to figure 4 and filed under the deposition number DSM 18890; d) DNA sequences coding for the protein sequence according to SEQ ID NO:2; e) DNA sequences which hybridize under stringent conditions with one of the DNA sequences listed under a), b), c) or d); f) DNA sequences which are related to the DNA/nucleotide sequences listed under a), b), c), d) or e) because of the degeneration of the genetic code; and g) complementary strands to the sequences listed under a) to f). The invention further relates to the protein coded thereby.

La présente invention concerne un système d'expression destiné à la production d'un ou de plusieurs polypeptide(s) cible(s), comprenant une cellule hôte dont le génome comprend une séquence d'ADN qui code pour la glycérine-3-phosphate déshydrogénase, est inactivée ou a subi une délétion partielle ou complète et qui a été transformée avec un élément extra-chromosomique qui comprend une séquence d'ADN qui code pour le ou les polypeptides cibles et la glycérine-3-phosphate déshydrogénase, le génome de la cellule cible et l'élément extra-chromosomique ne portant tous deux aucun gène de résistance aux antibiotiques; et une séquence d'ADN qui code pour un polypeptide ayant une activité de glycérine-3-phosphate déshydrogénase. Le système d'expression de l'invention se caractérise en ce que la séquence d'ADN est choisie parmi : a) des séquences d'ADN qui contiennent une séquence nucléotidique selon SEQ ID NO:1; b) des séquences d'ADN qui contiennent une séquence nucléotidique restituée par les nucléotides 1338 à 2375 de SEQ ID NO:1; c) des séquences d'ADN qui sont codées par le plasmide pTP01 avec la carte de plasmide selon la figure 4 et référencées par le numéro de référence DSM 18890; d) des séquences d'ADN qui codent pour la séquence protéique selon SEQ ID NO: 2; e) des séquences d'ADN qui sont hybridées dans des conditions de stringence avec l'une des séquences d'ADN définies selon a), b), c) ou d); f) des séquences d'ADN qui, en raison de la dégénérescence du code génétique, sont apparentées aux séquences d'ADN/nucléotidiques définies selon a), b), c), d) ou e); et g) des brins complémentaires aux séquences définies selon a) à f). L'invention se rapporte également à la protéine ainsi codée.

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